- 以索拉菲尼濃度為15uM處理索拉菲尼敏感LM3細(xì)胞和索拉菲尼耐藥LM3 舒萎，通過細(xì)胞增殖實驗和流式探究耐藥細(xì)胞的特征
Fig. 1b：15uM索拉菲尼處理后，LM3細(xì)胞克隆形成收到抑制蹭沛，而LM3-SR收到的抑制作用較低臂寝，揭示LM3-SR細(xì)胞增殖能力較LM3更強；
Fig. 1c：Hoechst 33342染色揭示LM3種凋亡（陽性）細(xì)胞顯著多于LM3-SR
Fig. 1d：流式結(jié)果表示摊灭，LM3-SR細(xì)胞暴露于索拉菲尼后凋亡的比例遠(yuǎn)低于LM3細(xì)胞咆贬。

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結(jié)論：這些發(fā)現(xiàn)提示，LM3-SR細(xì)胞對索拉菲尼抗性更強斟或，收到索拉菲尼的抑制增殖和促凋亡的影響較小

2.2 索拉菲尼抗性與無氧糖酵解相關(guān)

無氧糖酵解是腫瘤細(xì)胞代謝的重要標(biāo)志素征，無氧糖酵解增強的特征包括葡萄糖大量消耗和乳酸大量產(chǎn)生。有研究表明，長期服用索拉菲尼可以導(dǎo)致無氧糖酵解增強御毅，這可能與索拉菲尼耐藥相關(guān)根欧。
- 檢測LM3-SR細(xì)胞糖代謝水平
Fig. 2a：LM3-SR細(xì)胞的葡萄糖吸收的乳酸產(chǎn)生的量均高于LM3-SR細(xì)胞，提示LM3-SR細(xì)胞糖酵解水平高于LM3-SR細(xì)胞端蛆； 此外凤粗，15uM的索拉菲尼可有效抑制LM3細(xì)胞的葡萄糖吸收和乳酸生成，而在LM3-SR細(xì)胞中的抑制作用較小今豆。

- WB檢測參與糖酵解過程的三個關(guān)鍵酶嫌拣，包括己糖激酶2（HK2）,磷酸果糖激酶（PFK1）和丙酮酸激酶II（PKM2），和OXPHOS
Fig. 2b：LM3-SR細(xì)胞中糖酵解相關(guān)蛋白和OXPHOS受損相關(guān)蛋白的表達(dá)水平較高呆躲；
- 同時檢測了增殖指示分子PCNA异逐，以及凋亡標(biāo)志物Bcl-2，Bax插掂，caspase 3 和剪切的PARP
Fig. 2b：索拉菲尼對LM3-SR細(xì)胞的增殖灰瞻、糖酵解和自噬誘導(dǎo)的抑制作用受到限制，即提示索拉菲尼耐藥于糖酵解增強相關(guān)

- 相比較LM3細(xì)胞辅甥，Bel-7402細(xì)胞可能具有先天的索拉菲尼耐藥性酝润，故選擇Bel-7402細(xì)胞探索索拉菲尼耐藥的機(jī)制（Fig. S1）

- 進(jìn)一步探索體內(nèi)HCC細(xì)胞索拉菲尼耐藥的機(jī)制，將LM3和LM3-SR細(xì)胞種入裸鼠中建立異種移植腫瘤模型
Fig. 2c：LM3-SR細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤體積是LM3細(xì)胞的三倍多璃弄，索拉菲尼（10mg/kg）對LM3-SR組腫瘤的抑制作用無法達(dá)到對LM3組的抑制效果要销；

Ki-67是表示腫瘤細(xì)胞的分化程度的指標(biāo)，表示腫瘤增殖數(shù)值夏块。Ki-67是目前應(yīng)用較多的增殖細(xì)胞標(biāo)記物, 除了G0期不表達(dá), Ki-67在細(xì)胞繁殖的每個階段都有表達(dá), 細(xì)胞有絲分裂后Ki-67丟失抗原決定簇, 迅速降解, 其半衰期較短, 檢測結(jié)果可靠, 可較好地反映細(xì)胞的增殖活性疏咐。
[圖片上傳中...(image.png-240823-1594100116398-0)]

Fig. 2d：H&E，TUNEL和Ki-67的IHE染色結(jié)果顯示拨扶，LM3-SR組細(xì)胞壞死（粉色區(qū)域）和細(xì)胞凋亡（核深染）的比例減少凳鬓，但LM3-SR細(xì)胞含有更多的腫瘤實質(zhì)細(xì)胞，Ki-67著色也更多患民，索拉菲尼（10mg/kg）的治療效果減弱

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結(jié)論：索拉菲尼耐藥的LM3-SR細(xì)胞與糖酵解水平升高相關(guān)缩举，這可能導(dǎo)致索拉菲尼體內(nèi)治療效果減弱

2.3 相比LM3細(xì)胞，LM3-SR細(xì)胞對simvastatin更為敏感

simvastatin通常用于減低血脂匹颤，最近有研究發(fā)現(xiàn)simvastatin具有抗癌和抗纖維化的作用仅孩。
- 通過CCK-8探索simvastatin對LM3，LM3-SR和正常肝細(xì)胞LO2的影響
Fig. 3a：IC50值--LM3-55.99uM印蓖，LM3-SR-14.93uM辽慕，LO2：74.92uM；LM3-SR對simvastatin 的敏感性程度是LM3和LO2的3.75倍赦肃；10uM的simvastatin 可以致死LM3-SR細(xì)胞溅蛉，而對LO2細(xì)胞的活性沒有影響公浪；
- 選擇了10uM和0uM兩個濃度的simvastatin探究其對LM3和LM3-SR細(xì)胞凋亡和糖酵解的作用
Fig. 3b-c：10uM的simvastatin 對LM3細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用不顯著，但LM3-SR細(xì)胞中細(xì)胞凋亡水平較高船侧；50uM的simvastatin對LM3和LM3-SR細(xì)胞均具有誘導(dǎo)凋亡的作用
Fig. 3d：10 uM的simvastatin無法降低LM3細(xì)胞乳酸的產(chǎn)量或葡萄糖吸收的多少欠气，而50uM的simvastatin 可有效發(fā)揮抑制作用；而無論是10uM還是50uM,simvastatin都可降低LM3-SR的乳酸產(chǎn)量和葡萄糖的吸收镜撩；
Fig. 3e：WB進(jìn)一步驗證PCNA预柒，Bcl-2，Bax袁梗，Caspase 3宜鸯，剪切的PARP，糖酵解相關(guān)你的酶和OXPOHS的蛋白表達(dá)水平

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2.4 simvastatin與悚然菲尼聯(lián)合用藥可增強LM3-SR細(xì)胞對索拉菲尼的敏感性

- LM3-SR細(xì)胞對simvastatin的敏感性很高适贸，故15uM的索拉菲尼與10uM的simvastatin聯(lián)合使用，檢測simvastatin 是否能增強LM3-SR細(xì)胞對索拉菲尼的敏感性

• 不同劑量的索拉菲尼與simvastatin聯(lián)合給藥涝桅，通過CCK-8分析二者聯(lián)合用藥的作用
  Fig. 4a：Fa-Cl圖顯示索拉菲尼與simvastatin聯(lián)合用藥具有協(xié)同作用
  Fig. 4b-c：根據(jù)計算的dose reduction index(DRI)發(fā)現(xiàn)，10uM的simvastatin可減少2.843倍的索拉菲尼用量烙样；凋亡實驗同樣反映出索拉菲尼與simvastatin治療聯(lián)合治療可增強LM3-SR細(xì)胞的凋亡率 冯遂；
  Fig. 4d：索拉菲尼與simvastatin 的聯(lián)合用藥時，乳酸產(chǎn)量和葡萄糖吸收水平比二者單獨用藥低谒获，再一次驗證了索拉菲尼與simvastatin聯(lián)合用藥對糖酵解的抑制作用蛤肌；
  Fig. 4e：WB分析PCNA，Bcl-2批狱， Bax裸准，Caspase 3，裂解的PARP赔硫， 糖酵解相關(guān)酶和OXPOHS的表達(dá)水平進(jìn)一步進(jìn)行了驗證炒俱；
  Fig.S2：此外，索拉菲尼（5 μM）與simvastatin（10 μM）在LM3細(xì)胞中聯(lián)合用藥同樣發(fā)揮協(xié)同作用
  - 索拉菲尼與simvastatin在HCC細(xì)胞內(nèi)體聯(lián)合用藥
  Fig. 4f：索拉菲尼與simvastatin聯(lián)合用藥處理組小鼠的腫瘤體積明顯小于索拉菲尼或simvastatin單獨用藥組爪膊；H&E和TUNEL染色顯示索拉菲尼和simvastatin聯(lián)合用藥組壞死和凋亡區(qū)域較多权悟；
  - 我們還檢查了重要器官的病理表現(xiàn)，以確定Sim是否對器官功能有害
  Fig. 4h ：simvastatin對肝推盛、肺峦阁、腎以及心臟都沒有損傷作用
  - 因為simvastatin是降血脂的藥物，因此測定了血清中脂質(zhì)的水平
  Fig. 4i：simvastatin可以降低裸鼠TG耘成、TCHO和LDL-C水平榔昔，但HDL-L水平升高驹闰；而索拉菲尼與simvastatin聯(lián)合給藥同樣降低血脂的水平，提示simvastatin對HCC患者的肝功能和血脂水平均有改善作用
  
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  結(jié)論：索拉菲尼和simvastatin共處理可以通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡和抑制糖酵解增強HCC對索拉菲尼的敏感性

2.5 simvastatin通過抑制PKM2撒会、HIF-1α和PPAR-γ增強索拉菲尼的敏感性

- 通過qPCR檢測糖酵解嘹朗、葡萄糖和脂肪酸代謝相關(guān)的基因
Fig. 5a：在18中候選基因中發(fā)現(xiàn)，索拉菲尼和simvastatin共培養(yǎng)降低了PKM2茧彤，HIF-1α以及PPAR-γ（過氧化物酶體激活γ受體）的轉(zhuǎn)錄最為明顯骡显；WB檢測同樣驗證了qPCR的結(jié)果；simvastatin激活了PPAR-α的轉(zhuǎn)錄曾掂，并檢測了PPAR-α蛋白水平的表達(dá)惫谤；
Fig. 5b：與索拉菲尼單獨處理一樣，索拉菲尼聯(lián)合simvastatin共處理不能抑制PPAR-α的表達(dá)珠洗；
Fig. 5c：免疫熒光染色展示溜歪，索拉菲尼聯(lián)合simvastatin共處理后，PKM2许蓖、HIF-1α和PPAR-γ的免疫熒光強度降低蝴猪；
Fig. 5b-c：從PKM2的定位看出，索拉菲尼聯(lián)合simvastatin共處理不僅抑制PKM2的表達(dá)總量膊爪，同時特異性抑制PKM2在細(xì)胞核中的表達(dá)自阱；
Fig. 5d：通過質(zhì)-核蛋白抽提試劑盒區(qū)分蛋白質(zhì)的細(xì)胞器定位，WB進(jìn)行驗證米酬；此外沛豌，HIF-1α和PPAR-γ大多定位在細(xì)胞核，simvastatin處理可抑制二者在細(xì)胞核的表達(dá)
- 基于PKM2赃额、HIF-1α和PPAR-γ可定位于細(xì)胞核加派，作者設(shè)計了Co-IP實驗以明確他們之間的相互作用
Fig. 5e：HIF-1α和PPAR-γ可以被PKM2拉低，提示二者均可以在細(xì)胞核中與PKM2相互作用

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2.6 Sim enhances the sensitivity of Sora by down-regulating the HIF-1α/PPAR-γ/PKM2 axis

- 通過HIF-1α/PPAR-γ/PKM2信號通路的激動劑和抑制劑，探究simvastatin對HIF-1α飞盆，PPAR-γ以及PKM2的影響
Fig. 6a：50uM的FG-4592可有效上調(diào)HIF-α娄琉，PPAR-γ以及PKM2；在索拉菲尼與simvastatin 聯(lián)合用藥組桨啃，F(xiàn)G-4592誘導(dǎo)的上調(diào)發(fā)生逆轉(zhuǎn)车胡；10mM的BAY87-2243可顯著降低HIF-1α，PPAR-γ以及PKM2的表達(dá)照瘾；而在索拉菲尼和simvastatin共處理后匈棘，他們的抑制效果得到疊加
- 同樣檢測了HIF-1α，PPAR-γ和PKM2在核的表達(dá)
Fig. 6b：索拉菲尼與simvastatin共處理后析命，F(xiàn)G-4592與BAY87-2243的激活與抑制作用分別與上述相似主卫，反映出索拉菲尼與simvastatin共處理可抑制HIF-1α, PPAR-γ 和 PKM2 在細(xì)胞核的表達(dá)

- 這些結(jié)果提示HIP-1α是PPAR-γ和PKM2的上游調(diào)控因子逃默，接下來用PPAR-γ的激動劑和抑制劑再次驗證該假設(shè)
Fig. 6c：10uM的PPAR-γ的激動劑Rosiglitazone處理后，PPAR-γ與PKM2的表達(dá)上調(diào)簇搅，而HIF-1α的表達(dá)量與對照組相似完域；而索拉菲尼與simvastatin共處理后，Rosiglitazone無法再上調(diào)PPAR-γ和PKM2的表達(dá)瘩将，而HIF-1α仍保持與對照組相近的表達(dá)水平吟税；此外，PPRA-γ的抑制GW9662(2uM)可有效抑制PPAR-γ和PKM2的表達(dá)姿现，而HIF-1α的表達(dá)水平保持不變肠仪；索拉菲尼與simvastatin共處理后，PPAR-γ和PKM2表達(dá)下調(diào)更為明顯备典；
Fig. 6d：在核中异旧，HIF-1α，PPAR-γ和PKM2的變化與總蛋白水平的變化相同
實驗結(jié)果提示提佣，HIF-1是PPAR-γ的上游調(diào)控因子吮蛹，而PKM2是PPAR-γ下游的調(diào)控因子，基于此拌屏，選擇PKM2的激動劑和抑制劑再次驗證

PKM2是激酶潮针，DASSA58可以提高PKM2的酶活性，但是抑制其表達(dá)倚喂，而復(fù)合物3K可以減弱PKM2的酶活性然低，但促進(jìn)其表達(dá)

Fig. 6e：復(fù)合物K3（3uM）處理后，PKM2的表達(dá)上調(diào)务唐，而PPAR-γ與HIF-1α的表達(dá)與對照組無差異；而 復(fù)合物K3與索拉菲尼和simvastatin共處理后带兜，PKM2的上調(diào)減弱枫笛，HIF-1α與PPAR-γ的表達(dá)與索拉菲尼和simvastatin聯(lián)合處理組無差異；DASA58(40uM)與復(fù)合物K3的作用效果完全相反刚照；
Fig. 6f：細(xì)胞核中刑巧，復(fù)合物K3或DASA58處理后與總蛋白的表達(dá)變化相似
結(jié)論：HIF-1α是PPAR-γ的上游調(diào)控因子，PKM2是PPAR-γ的下游調(diào)控因子无畔，HIF-1α/PPAR/PKM2軸被simvastatin被抑制
PKM2不僅是糖酵解過程中的一個限速酶啊楚，也是核的重要轉(zhuǎn)錄因子
- 通過慢病毒包裝探索PKM2在索萊菲妮耐藥過程中的作用機(jī)制
Fig. 6g：在LM3細(xì)胞中過表達(dá)PKM2（LM3-PKM2-OE）
Fig. 6h：在LM3-SR細(xì)胞中敲低PKM2（ LM3-SR-PKM2-KD ）

Fig. 6i-j ：LM3過表達(dá)PKM2時，PCNA表達(dá)上升浑彰；而Bax恭理，caspase-3以及OXPHOS表達(dá)收到抑制；此外郭变，乳酸產(chǎn)量核葡萄糖吸收水平增加颜价；而在LM3-SR細(xì)胞中敲低PKM2時涯保，洗寶寶增殖，凋亡抑制核糖酵解水平全部收到抑制周伦，提示LM3-SR細(xì)胞對索拉菲尼的耐藥性獲得逆轉(zhuǎn)夕春；
- CCK-8驗證LM3細(xì)胞中過表達(dá)PKM2會導(dǎo)致對索拉菲尼產(chǎn)生抗性這一假設(shè)
Fig. 6k：LM3-PKM2-OE細(xì)胞索拉菲尼半致死濃度為8。68uM(LM3:4.47uM)专挪；
Fig. 6l：LM3-SR中細(xì)胞敲低PKM2時及志，索拉菲尼與simvastatin共處理組中，相比較索拉菲尼單獨處理寨腔，simvastatin無法抑制PKM2速侈，PCNA，Bcl-2的表達(dá)脆侮，也無法上調(diào)Bax锌畸，caspase-3he OXPHOS的表達(dá)；

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- 結(jié)論：HIF-1α/PPAR-γ/PKM2軸是simvastatin發(fā)揮藥效的靶點之一靖避，也證實了過表達(dá)PKM2或?qū)е翷M3細(xì)胞對索拉菲尼產(chǎn)生耐藥性潭枣，而敲低PKM2或能提到LM3-SR細(xì)胞對索拉菲尼的敏感性

3. 討論

對人類來說，對索拉菲尼產(chǎn)生抗性的平均時間大約是12.2個月幻捏，但可能在幾個月到幾年之間變化盆犁，建立索拉菲尼耐藥的HCC細(xì)胞系通常需要12個周。

• 本實驗?zāi)退幖?xì)胞模型：LM3-SR細(xì)胞篡九，可耐受10uM的索拉菲尼（IC50為16.33uM）谐岁；

索拉菲尼耐藥機(jī)制的研究現(xiàn)狀：

1. HCC細(xì)胞中，ERGF榛臼，c-Jun核Akt激活伊佃，EMT升高，腫瘤干細(xì)胞沛善，缺氧微環(huán)境航揉，自噬以及外泌體增加；
2. 無氧糖酵解或可導(dǎo)致索拉菲尼耐藥金刁；
   20世紀(jì)20年代（1920s）帅涂， Otto Warburg發(fā)現(xiàn)，甚至在氧氣充足的條件下尤蛮，腫瘤細(xì)胞更傾向于通過糖酵解產(chǎn)生乳酸媳友，而不是通過氧化磷酸化快速產(chǎn)生大量的代謝中間產(chǎn)物，這一現(xiàn)象如今被稱為Warburg效應(yīng)产捞；
   Fiume等人發(fā)現(xiàn)醇锚，索拉菲尼治療可破壞氧化磷酸化，促進(jìn)在葡萄糖充足的環(huán)境中生長的細(xì)胞進(jìn)行無氧糖酵解坯临；
   Reyes等人發(fā)現(xiàn)搂抒，索拉菲尼核2-DG（2-脫氧-D-葡萄糖）共處理可以通過抑制ATP的產(chǎn)生協(xié)同抑制索拉菲尼耐藥的HCC細(xì)胞增殖艇搀；
   Wong等人發(fā)現(xiàn)，2-DG可以逆轉(zhuǎn)HCC細(xì)胞對索拉菲尼的抗性求晶；

• 本實驗：LM3-SR細(xì)胞乳酸產(chǎn)量與葡萄糖消耗較LM3細(xì)胞更多焰雕，支持了索拉菲尼耐藥的HCC細(xì)胞無氧糖酵增加；

有研究表明芳杏，simvastatin參與抑制糖酵解與索拉菲尼耐藥矩屁；
Christile等人發(fā)現(xiàn)，他汀類可部分阻斷糖酵解產(chǎn)生的ATP的利用爵赵；
Huang等人發(fā)現(xiàn)吝秕，pitavastatin 和 paclitaxel的聯(lián)合用藥可以顯著降低腎細(xì)胞癌糖酵解速率；
Nowis等人空幻，報道烁峭，他汀類破壞從人類肝分離的細(xì)胞的葡萄糖吸收；
這些研究提示simvastatin或也可以有效抑制糖酵解，改善糖酵解介導(dǎo)的索拉菲尼耐藥；

• 本實驗信柿，基于他汀類多這種作用的特征，聯(lián)合simvastatin與索拉菲尼探究simvastatin是否可以提高LM3-SR細(xì)胞對索拉菲尼的敏感性：
  1.分別檢測simvastatin對LM3和LM3-SR細(xì)胞的作用鬓梅，發(fā)現(xiàn)，LM3-SR細(xì)胞對simvastatin（10uM）更為敏感---表現(xiàn)為simvastatin給藥后谨湘，增殖受抑制绽快，凋亡增強；simvastatin（10uM）同樣抑制無氧糖酵解水平紧阔，抑制糖酵解相關(guān)蛋白的表達(dá)坊罢；

2. 索拉菲尼與simvastatin聯(lián)合協(xié)同促進(jìn)LM3-SR細(xì)胞對索拉菲尼的敏感性---CI值小于1，增殖受到抑制擅耽，凋亡加強艘绍；

無氧糖酵解過程中有三個關(guān)鍵限速酶，分別為HK2,PFK1和PKM2秫筏，其中，PKM2催化糖酵解的最后一步挎挖，在多種腫瘤中均表達(dá)升高这敬；
PKM2在腫瘤細(xì)胞中主要發(fā)揮的三個作用：
（1）胞質(zhì)PKM2是一種具有高酶活性的四聚體，參與糖酵解蕉朵，為癌細(xì)胞生物合成提供更多的代謝中間體崔涂；（2）PKM2的二聚體亞型可移位至細(xì)胞核，作為轉(zhuǎn)錄共激活因子始衅，從而促進(jìn)有利于生長的基因的轉(zhuǎn)錄冷蚂，如GLUTs缭保、HIF-1、VEGF-A蝙茶、Bax艺骂、Bcl-2和PCNA；（3）PKM2還可以在氧化應(yīng)激下易位至線粒體隆夯，與Bcl-2 / Bcl-xl相互作用钳恕，從而抑制癌細(xì)胞凋亡；
基于PKM2的以上作用蹄衷，Zhang等人報道沉默PKM2可以使Hep3BSR和LM3-SR細(xì)胞對索拉菲尼再次致敏忧额；
Wong 等人發(fā)現(xiàn)PRMT6-ERK-PKM2調(diào)控軸參與HCC細(xì)胞索拉菲尼耐藥和葡糖糖代謝；

• 本實驗愧口，首次發(fā)現(xiàn)索拉菲尼與simvastatin聯(lián)合用藥不僅可以抑制PKM2的表達(dá)睦番，同時抑制PKM2向細(xì)胞和的轉(zhuǎn)運；其次耍属，揭示了在LM3細(xì)胞中過表達(dá)PKM2導(dǎo)致對索拉菲尼產(chǎn)生抗性托嚣；
  敲低LM3細(xì)胞PKM2-SR可有效恢復(fù)LM3-SR對索拉菲尼的敏感性；索拉菲尼與simvastatin聯(lián)合治療無法抑制LM2-SR-PKM2-KD細(xì)胞的增殖恬涧，促進(jìn)其凋亡注益；這些研究發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步為PKM2在索拉菲尼與simvastatin聯(lián)合治療中發(fā)揮至關(guān)重要的作用提供了證據(jù)；

PKM2基因的表達(dá)由多種因子驅(qū)動溯捆，包括HIF-1α丑搔，STAT3，β-Catenin和NF-κB

• 本實驗提揍，發(fā)現(xiàn)HIF-1α和PPAR-γ可能參與了simvastatin對索拉菲尼抗性的再敏化作用啤月；

HIF-1α是參與細(xì)胞應(yīng)答缺氧的調(diào)控因子，可直接激活糖酵解相關(guān)基因（GLUTs和PKM2）的轉(zhuǎn)錄促進(jìn)癌細(xì)胞糖酵解;
PPAR-γ通過調(diào)節(jié)糖脂代謝在維持能量穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用劳跃，PPAR-γ在癌細(xì)胞中表達(dá)升高谎仲，導(dǎo)致腫瘤生長加速；
但PPAR-γ受體激動劑和拮抗劑在腫瘤治療過程中的作用十分復(fù)雜刨仑，因為它們都被發(fā)現(xiàn)可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長郑诺；
PPAR-γ可以促進(jìn)脂代謝過程中葡萄糖的吸收，誘導(dǎo)糖酵解蛋白（如GLUT-4）的表達(dá)杉武；
有研究發(fā)現(xiàn)辙诞，atorvastatin可以抑制HIF-1α/PPAR-γ途徑和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的存活；
此外轻抱，Panasyuk等人報道飞涂，PPAR-γ可促進(jìn)脂肪肝中PKM2和

• 本實驗中，CoIP 發(fā)現(xiàn)PKM2可以與HIF-1α和PPAR-γ相互作用；隨后通過HIF-1α较店，PPAR-γ和PKM2激動劑軸和抑制劑在LM3-SR細(xì)胞中確定了 HIF-1α/ PAR-γ/PKM2在LM3-SR細(xì)胞中的作用（促進(jìn)糖酵解）士八；通過拯救實驗揭示索拉菲尼與simvastatin聯(lián)合用藥的效果可被HIF-1α和PPAR-γ激動劑及PKM2抑制劑逆轉(zhuǎn)；這些發(fā)現(xiàn)為HIF-1α/PAR-γ/ PKM2軸作為HCC細(xì)胞對索拉菲尼再次敏化過程中simvastatin的靶標(biāo)提供了令人信服的證據(jù)梁呈；

索拉菲尼耐藥的機(jī)制復(fù)雜婚度，除了當(dāng)前對HIF-1α/PPAR-γ/PKM2軸的探究，PKM2的異構(gòu)體PKM1同樣被報道通過自噬增強糖酵解捧杉，導(dǎo)致癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性陕见；
此外，原癌基因c-Myc味抖，N-Myc和L-Myc在HCC糖酵解中同樣發(fā)揮重要的作用评甜；

據(jù)報道，C-Myc在HCC細(xì)胞中過表達(dá)仔涩，可通過增加糖酵解相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)（如GLUT1忍坷，LDH和PKM2）促進(jìn)Warburg效應(yīng)；
相反熔脂，細(xì)胞核中的PKM2也可以調(diào)控c-Myc佩研，因為PKM2可以移位到細(xì)胞核中，作為β-catenin的輔激活劑霞揉，誘導(dǎo)c-Myc表達(dá)旬薯，導(dǎo)致c-Myc靶向基因的表達(dá);
此外，c-Myc高活性將增強癌細(xì)胞中谷氨酰胺分解适秩，促進(jìn)癌癥進(jìn)展绊序；
基于以上，作者預(yù)測c-Myc可能成為治療HCC下?lián)芩骼颇崮退幍臐撛诎悬c秽荞。

4. 結(jié)論

• simvastatin與索拉菲尼聯(lián)合用藥具有安全性保障骤公，不會損傷肝功能或造成其他器官的損傷；
• simvastatin可以抑制HIF-1α/PPAR-γ/PKM2軸扬跋，抑制PKM2介導(dǎo)的糖酵解阶捆，降低HCC細(xì)胞的增殖速率，促進(jìn)其凋亡钦听，從而對索拉菲尼再次致敏