1奕巍，電子圖譜的酶切
將下載的pX330序列用Clone Manager打開(kāi)侦讨，點(diǎn)擊小剪刀驶冒，輸入BbsI,點(diǎn)擊OK苟翻，
Fig1.PNG
結(jié)果可以看到，BbsI這種IIs型酶將pX330切為兩個(gè)片段骗污，一個(gè)22bp崇猫，另一個(gè)8462bp。為什么是兩個(gè)片段而不是一個(gè)大片段呢需忿？因?yàn)檫@個(gè)質(zhì)粒有BbsI兩個(gè)酶切位點(diǎn)诅炉。見(jiàn)上一節(jié)http://www.reibang.com/p/f5ce545a65e6
Fig2.PNG
選擇22bp的片段，點(diǎn)擊Use Now屋厘，OK涕烧，Sequence，顯示如圖序列汗洒，
Fig3.PNG
2.1，質(zhì)粒的酶切
拿到引物和pX330質(zhì)粒后溯香，需要酶切和連接才能將靶序列替換上去。
2.2浓恶，引物的擬合
引物是單鏈的DNA玫坛，要變?yōu)殡p鏈才能做連接。擬合就是將兩條單鏈DNA通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)變?yōu)殡p鏈的過(guò)程包晰。
擬合分為兩步：一湿镀、兩條引物加到buffer中，94℃變性10 min伐憾；二勉痴、冷卻至室溫。
接下來(lái)就是擬合好的片段和酶切好的pX330骨架做連接了树肃。
