前述,我們推了一份教程,《QTLseq數據分析国章,鼠標點點,復現 Nature Plant 番茄論文結果》豆村,其中詳細較少了如何使用 TBtools 的系列插件液兽,在本地筆記本電腦上完成 BSAseq 或 QTLseq 數據分析。從原始測序數據fastq文件開始掌动,到最后的 QTL 位點四啰。
在該教程中,我們基本重現了數據來源論文的分析結果粗恢,但也同時發(fā)現定位出來的位點與實際位點有偏移拟逮,大體原因如下:
其一,使用的參考基因組序列版本不對适滓,查看后敦迄,得到確認,所以偏移量直接從 5Mb 縮小到 2Mb
其二,盡管縮小罚屋,但仍然存在坐標偏移苦囱,于是審視了流程,發(fā)現如下
當然脾猛,這個事情就這樣了撕彤。不過我還是不死心,因為你不去確認一下到底是不是使用的數據問題猛拴,就會留下這個疑問羹铅。于是我直接上了所有數據,花多了兩天的計算時間愉昆。結果如下
前述只使用一部分數據的結果(混池17:21)职员,位置明顯偏移到60Mb+
此處我們使用全部數據的結果(混池35:35),那么到文稿驗證的基因位置多了一個關鍵峰值跛溉,大概在 59Mb+ 的位置焊切。
Emmm,完美芳室。所以BSAseq混池的樣品专肪,還是要足夠多才好。