免疫組織化學(xué)（IHC）
包埋組織
在４％多聚甲醛溶液/10%的中性福爾馬林中固定組織48小時后墩蔓，放入組織包埋盒中脫水诉儒，浸蠟后包埋
切片
修剪石蠟切片同欠，直至將石蠟切片修到大部分組織在切面上虎囚。
蠟塊制備
將組織蠟塊提前泡到冰水混合物中使其變軟淮椰，將組織蠟塊放在切片機上切出５微米的切片五慈，60°Ｃ烘片１-2小時。
脫臘
１將切片放到60°Ｃ烘箱中烘片４ｈ以上主穗。
２在二甲苯I里置入片子泻拦，持續(xù)0.5 h，再置于二甲苯II忽媒，依然持續(xù)0.5 h争拐。
３.３? 水化
１通過酒精，浸泡切片晦雨，酒精濃度不一架曹，分為７０％、８０％闹瞧、９０％绑雄、９５％、１００％奥邮，各濃度浸泡時間也有所差異万牺，前３個濃度都是各自浸泡２分鐘，后面兩個濃度分別浸泡5分鐘漠烧、10分鐘杏愤。
２最后將片子放到雙蒸水中浸泡２min。
３.４ 組化
１封閉處理：選擇內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑已脓，處理時間為20 min珊楼。
２用雙蒸水浸泡三次，單次時間5 min度液。
３抗原修復(fù)：準備pH＝6.0的10 nM檸檬酸抗原修復(fù)液400-600 ml厕宗，把片子放到里面画舌，用保鮮膜封住燒杯口防止沸騰溢出。之后放到微波爐中用高火加熱10 min已慢。
４加熱后用雙蒸水補齊液面曲聂，在微波爐中加熱40 min（中低火至解凍之間），每隔10 min用雙蒸水補齊液面佑惠。
５修復(fù)結(jié)束后朋腋，放到室溫下，使其自然冷卻膜楷。
６DDW清洗180＂之后旭咽，通過PBS清洗，３分鐘／次赌厅，進行三次穷绵。
７通過一抗封閉，保持４°Ｃ特愿，第二天進行溫度回升仲墨，為37°Ｃ，然后通過PBS清洗揍障，持續(xù)５分鐘目养。
８在其中添加反應(yīng)增強液，然后孵育亚兄，室溫條件混稽，持續(xù)20 min，再通過PBS清洗审胚，３分鐘／次匈勋，進行三次。
９加入增強酶標山羊抗小鼠／兔IgG聚合物膳叨，然后孵育洽洁，室溫條件，持續(xù)20 min菲嘴，再通過PBS清洗饿自，3分鐘／次，進行三次龄坪。
1０滴加DAB顯色液（現(xiàn)用現(xiàn)配昭雌、比例1:19），室溫孵育2-10 min（根據(jù)不同的抗體自行選擇染色時間）健田。用自來水輕輕沖洗掉烛卧。
１１復(fù)染：加蘇木精染色50 s。用DDW妓局，3 min总放，PBS呈宇，５min X３次。
１２脫水：將片子依次浸泡到不同濃度的酒精梯度中：７０％局雄，ｌｍｉｎ—８０％甥啄，ｌｍｉｎ—９０％，1 ｍｉｎ—９５％ Ｉ炬搭，５ｍｉｎ—９５％ II 蜈漓，５ｍｉｎ—１００％Ｉ，５ｍｉｎ—１００％ II宫盔，５ｍｉｎ迎变。
１３透明：利用二甲苯Ｉ、二甲苯 II 進行處理飘言，每次處理持續(xù)20 min。
１４中性樹脂封片驼侠，中性樹脂姿鸿，加蓋玻片(組織部位切勿殘留小氣泡)，自然晾干倒源。
