? ? ? ?上期說到我在做組織的脫水或者說固定的時候儒旬，當(dāng)我完成操作準(zhǔn)備上機切的時候出現(xiàn)了塌陷和皺縮的情況，上期大概考慮了是否是固定液的問題帖族，這一期呢栈源，我們千萬不能忽視配制固定液或者是蔗糖溶液時所選擇溶劑這個因素。
? ? ? ?首先呢竖般，我們平常用的溶劑一般有兩種甚垦，一種是三蒸水，另外一種呢是PBS,用的比較多的PBS基本上都是直接購買的，或者說是買的粉末自己配的艰亮，但是我們要注意的一點是PBS的全稱呢是叫做磷酸緩沖鹽溶液闭翩。
? ? ? ? 比如說我們實驗室如果是用在細(xì)胞上的話，基本上都是Gibcol的1X PBS迄埃，那這個是指多少摩爾濃度的呢疗韵？實際上這個1X就是指0.01mol/L的溶液。如果要是用在細(xì)胞放外邊的話侄非，比如說免疫組化或者免疫熒光的時候蕉汪，所用到的基本上都是買的PBS粉末，自己配成的PBS溶液逞怨。當(dāng)然啦肤无，我們也可以自己去配制，這個吧骇钦，還是比較推薦自己去配置宛渐，當(dāng)然僅僅是用于非細(xì)胞的情況下。
? ? ? ?為什么呢眯搭？首先呢窥翩，我們先來看看0.01 mol/L的用于做免疫組化的PBS是怎么配的？NaH2PO4·2H2O：0.2964g鳞仙；Na2HPO4·12H2O：2.9g寇蚊；NaCl：8g。再來看一下要是0.01mol/L的PBS用于細(xì)胞上的時候的配方：NaCl：8g棍好；Na2HPO4·12H2O：2.9g仗岸；KCl：0.2g；KH2PO4·12H2O：0.24g借笙。
? ? ? ?然后我們就會發(fā)現(xiàn)這兩個有點不太一樣啊扒怖，用于細(xì)胞培養(yǎng)的這一個配方的話，為了保證細(xì)胞的活性业稼，維持Na/K平衡的盗痒，但是免疫組化細(xì)胞已經(jīng)死了，就不需要考慮細(xì)胞活性的問題了低散，只要細(xì)胞不變形就沒問題了俯邓。不管哪一個配方，NaCl都是占主要成分的熔号，其作用還是用來維持滲透壓的稽鞭，而這里邊的HPO4/H2PO4是用來維持PH值的。
? ? ? ?那就比較好奇了引镊，這個0.01 mol/L PBS是指溶液總濃度呢朦蕴，還是其中某個離子的濃度吃嘿？那就隨意的計算一下這里邊的離子濃度。NaCl：0.13675?mol/L梦重，HPO42-：0.0081 mol/L兑燥，H2PO4-：0.0019 mol/L，這就看出來了琴拧，其實0.01 mol/L PBS指的就是這里邊PO42-的濃度降瞳。
? ? ? ? 那我的實驗中眼球脫水或者固定后為什么會出現(xiàn)這種皺縮和塌陷的情況呢？首先考慮到的就是滲透壓的問題蚓胸，那滲透壓有沒有啥計算公式呢挣饥？有計算公式，πV=nRT 或π=cRT （式中π為溶液的滲透壓，V為溶液的體積，c為溶液的濃度码泞，R為氣體常數(shù)背零，n為溶質(zhì)的物質(zhì)的量煮嫌，T為絕對溫度）。但是這種有些麻煩，上網(wǎng)查了一下后，直接記住一句話忍宋，滲透壓與總離子濃度（摩爾濃度）成正比。
? ? ? ?生理鹽水的總離子濃度為：0.307692308 mol/L风罩；0.01 mol/L PBS的為：0.3016 mol/L糠排；0.1 mol/L PBS的為：0.5545 mol/L，然后我們就會發(fā)現(xiàn)這個與生理鹽水的差老遠(yuǎn)了超升，我們就不能用這個做免疫組化或者去配多聚甲醛了入宦。那說明濃度是比較高的，那就減少一點NaCl室琢，因為標(biāo)準(zhǔn)的生理鹽水的值為：0.307692308乾闰。所以我們就可以擬定一下最終的0.1 mol/L PBS的配方為NaH2PO4·2H2O：2.964g；Na2HPO4·12H2O：29g研乒；NaCl：0.78g汹忠。如果要是考慮到氯化鈉的存在會影響到最終的滲透壓的話淋硝，可以把這一丟丟的NaCl去掉雹熬，去掉之后的總離子濃度為0.281?mol/L，與生理鹽水和0.01 mol/L PBS的相差不大谣膳，甚至說是無顯著性差異竿报，說的更準(zhǔn)確點就是對于死細(xì)胞來說，影響并不大继谚。
? ? ? ?如果要是不加NaCl的話烈菌，配成的溶液就是PB溶液，就不在這里多講了，所以我最終選定的是保持滲透壓穩(wěn)定的PB來配置固定液和脫水劑芽世，那用PB溶液作為溶劑配制蔗糖溶液挚赊，這樣脫水的話，可以保證PH維持在7.2-7.4之間济瓢，同時又可以避免在冰凍的過程中鹽類造成的額外的損傷荠割。
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