RNA修飾過去的研究基礎(chǔ)是認(rèn)為RNA在核酸結(jié)構(gòu)上的化學(xué)微調(diào)镇饺，隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展以及相關(guān)產(chǎn)品化抗體出現(xiàn)堵第，對RNA修飾的研究不只是停留在結(jié)構(gòu)微調(diào)，當(dāng)前發(fā)現(xiàn)RNA修飾在轉(zhuǎn)錄組水平廣泛存在，并且是可逆的動態(tài)調(diào)控狀態(tài)宗兼，參與生物進(jìn)程鐘的多方面抚垄，包括：細(xì)胞分化蜕窿、性別決定、腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移呆馁、DNA的損傷修復(fù)等生物學(xué)功能桐经，今天帶給大家的是RNA甲基化修飾研究內(nèi)容。RNA甲基化發(fā)生在RNA分子上不同位置的甲基化修飾現(xiàn)象浙滤，常見的RNA轉(zhuǎn)錄后修飾方式有6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine阴挣，m6A）和5-甲基胞嘧啶（5-methylcytidine，m5C）纺腊。
1畔咧、技術(shù)簡介
甲基化RNA免疫共沉淀基于抗體（m6A）特異性結(jié)合甲基化修飾的堿基茎芭，以磁珠包被的抗體結(jié)合修飾RNA，通過免疫結(jié)合吸附誓沸，純化產(chǎn)物富集甲基化修飾片段梅桩，后續(xù)通過高通量測序，在全轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)研究發(fā)生甲基化的RNA區(qū)域拜隧，可以是lncRNA宿百、mRNA、circRNA等虹蓄。
2犀呼、技術(shù)流程
? 細(xì)胞樣品m6A RNA表達(dá)量測定（dot-blot方法）
? 細(xì)胞裂解，獲取總RNA樣本
? M6a抗體IP沉淀結(jié)合與磁珠共價形成復(fù)合物
? 洗脫純化獲取甲基化修飾的RNA產(chǎn)物
? 高通量測序
? 生物信息學(xué)分析
3薇组、技術(shù)應(yīng)用
?mRNA修飾
?轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控
??轉(zhuǎn)錄和翻譯過程的聯(lián)系
4外臂、應(yīng)用案例
m6A mRNA methylation regulates CTNNB1 to promote the proliferation?of?hepatoblastoma
作者選取肝母細(xì)胞癌未模型，在細(xì)胞水平研究上調(diào)m6A甲基化修飾和m6A因子律胀，對肝癌HB細(xì)胞的生長宋光、增殖、凋亡的影響炭菌，探究得出METTL3作為預(yù)后因子在HB細(xì)胞中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用罪佳，繼而在動物水平，建立NC組和shRNA敲低組黑低，觀察腫瘤形成的大小赘艳，闡明METTLL3在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要調(diào)節(jié)作用，表型闡述后進(jìn)一步在表觀遺傳水平克握，研究分子機(jī)制蕾管，通過m6a-Seq和生信分析尋找METTL-3的靶標(biāo)結(jié)合CTNNB1。
客戶提供：
? 僅限人菩暗、大鼠掰曾、小鼠物種的樣本，細(xì)胞核組織均可停团；
? 細(xì)胞旷坦，數(shù)量1-3x107個；
? 組織佑稠，所需10-30mg秒梅。
輝園苑提供：
? 用于m6a甲基化RIP實驗的抗體；
? Dot-blot檢測本底甲基化修飾RNA水平舌胶；
? MeRIP免疫共沉淀實驗番电；
? 高通量測序及生物信息學(xué)個性化分析；
? 完整實驗報告及原始數(shù)據(jù)結(jié)果辆琅。
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Metastasis娩井。
