通常使用Annexin V-FITC / 7-AAD 對凋亡細(xì)胞進(jìn)行染色灵巧，用流式檢測陽性染色數(shù)捏题，計算IC50脑题。
本人最近在養(yǎng)HUVEC，并檢測某種藥物的IC50屏轰，記錄一下步驟颊郎。在實(shí)驗(yàn)設(shè)計階段，要設(shè)置一組只染AnnexinV的孔霎苗，和一組什么都不染的空姆吭，一定要設(shè)置對照組，溶劑組唁盏，并且溶劑組和對照組都要染AnnexinV/7-AAD内狸。
1.正常消化細(xì)胞，收集細(xì)胞到5ml流式管內(nèi)厘擂，350g 5min離心去上清昆淡。（離心可不用在細(xì)胞房進(jìn)行）
2.加入200μL 預(yù)冷的PBS重懸細(xì)胞，并搖勻刽严，再次350g 5min離心去上清昂灵；（清洗細(xì)胞）
3.加入200μL 1乘的binding buffer（按照說明書配好，本人用的四正柏）再洗一次舞萄，注意搖勻眨补，再次離心去上清。
4.加入100μL?1乘的binding buffer重懸倒脓，搖勻撑螺，吸100μL到96孔板（不同濃度，不同復(fù)孔都要換槍頭）崎弃，加入5μL 的Annexin V-FITC实蓬，避光孵育5min。（不同牌子避光孵育時間不一樣）
5.按照每孔4μL 7-AAD和100μL PBS配置好溶液吊履，當(dāng)避光孵育結(jié)束后安皱，每孔加入104μL的溶液，立即上機(jī)檢測艇炎。本人用的流式是guava酌伊，一次性檢測所有孔，中間不能改電壓缀踪。
6.測定結(jié)束后居砖，可以使用儀器直接畫IC50的圖，也可以使用graph pad計算IC50
