一主届、物品準(zhǔn)備
① 帶蓋流式管(照紫外)
② 抗體
③ 冰盒
二、步驟
PBMC為例(離心參數(shù)不同)
【1】上樣管準(zhǔn)備
① 輕吹遗契,收集細(xì)胞離心 300g 5min
② 1mL PBS重懸,取20μL計(jì)數(shù),余離心后去上清
③ 沉淀用100μL PBS重懸
④ 取新EP管丐巫,將懸液轉(zhuǎn)移(5mL離心管太深,加抗體時(shí)槍身可能引入污染)
⑤ 加抗體勺美,振蕩递胧,冰上避光孵育30min
For flow cytometric staining, the suggested use of this reagent is?5 μl per million cells in 100 μl staining volume?or 5 μl per 100 μl of whole blood.
⑥ PBS 洗2遍
⑦ PBS 重懸(可加不多于2%的血清)上機(jī),維持濃度 10^6 ~ 10^7/mL(1mL液體耗時(shí)25~30min)
【中心實(shí)驗(yàn)室BD 500μL即可赡茸,Beckman稍微多一點(diǎn)缎脾;分析 - 腫研所張老師200μL】
【2】接收管準(zhǔn)備
接收管加1640全培(雙抗?jié)舛瓤缮晕⑸险{(diào),血清濃度可提高到20%)
接收管要多備占卧,因分選出來(lái)的不僅有細(xì)胞遗菠,還有遠(yuǎn)大于上樣量的鞘液
可按 每2mL上樣液 ~ 1陽(yáng)性管 + 2陰性管 準(zhǔn)備
【3】送樣
① 1000μL槍联喘、槍頭盒、無(wú)菌PBS(以防老師要求稀釋?zhuān)┱尬场V網(wǎng) + 50mL離心管(以防萬(wàn)一)豁遭、光盤(pán)
② 冰盒,上樣管牲平,接收管堤框,酒精