轉發(fā)自http://crickcollege.com/news/169.html
寫在前面
從10月底開始治笨，由克里克學院與康昱盛主辦的蛋白質組學網(wǎng)絡大課堂正式開班了猖任，整個課程由21堂大課組成龄糊。作為蛋白質組學純小白一枚剩晴，小編也打算借這個機會好好學習感受一下萤晴。以下是小編整理的第一講“蛋白質組學研究方法概述”的聽課筆記第二部分互艾，分享給各位也想入入門的小伙伴們~
授課老師
這次課程的授課老師完全可以用青年才俊四個字來形容：她于2014年博士畢業(yè)于德國慕尼黑工業(yè)大學（Technische Universit?t München）生物分析與蛋白質組學研究所，師從領域的大牛Prof. Bernhard Kuster摇天。主攻方向是基于串聯(lián)質譜的蛋白質組學在腫瘤藥物研究中的應用粹湃。她就是目前任職于上海交通大學系統(tǒng)生物醫(yī)學研究院的助理研究員庫鑫博士（此處應該有掌聲）！庫博士目前的研究方向是腫瘤相關生物標志物的發(fā)現(xiàn)和蛋白質糖基化修飾泉坐。
（文中所有圖片均來自庫鑫博士的講義，并獲得發(fā)表授權裳仆。）
一腕让、蛋白定性檢測（續(xù)）
上一篇我們聊了基于質譜的蛋白質組學研究背景，以及定性檢測的一部分歧斟，今天我們繼續(xù)分享課程里定性檢測的數(shù)據(jù)庫搜庫纯丸、結果評估，以及定量檢測和靶向蛋白質組學的內(nèi)容静袖。
搜庫工具
說到搜庫觉鼻，對用我們使用者來說稿蹲，其實并不復雜纹因，只需要搞清楚以下五個要素住闯，搜庫就妥妥的了增拥！
1） 蛋白序列數(shù)據(jù)庫：通常是FASTA格式震缭，從公共數(shù)據(jù)庫下載白群，如果是未知的蛋白坎吻，可以從DNA測序的序列翻譯成蛋白拍棕；最常用的數(shù)據(jù)庫Uniprot解总。
2） 特異性酶解：在搜庫時要明確使用的蛋白酶是哪一種贮匕，比如最常用的胰蛋白酶（軟件會自動識別它在K或R后面切斷肽段）。如果我們不對酶切位點進行限制花枫，計算機只好把所有的可能都窮盡一遍刻盐，產(chǎn)生非常多可能的肽段掏膏，不僅運行時間會非常長，而且錯誤匹配的可能性也會高很多敦锌。
3） 轉錄后修飾：分兩類壤追，一種叫固定修飾，即在某種氨基酸殘基上一定出現(xiàn)的特定基團修飾供屉，比如加入乙跣斜化試劑進行乙酰化修飾伶丐；另一種叫可變修飾（動態(tài)修飾）悼做，就是說某一種氨基酸殘基可能會被某種基因修飾（被修飾的可能性比較大），例如甲硫氨酸的氧化等哗魂。
4） 碎片類型：上一篇專門講過肛走，比如CID或HCD碎裂產(chǎn)生by離子，搜索引擎就只按by離子的規(guī)則切割录别；沒特別的原因朽色，不建議大家再加入其它離子類型，不然會大大延長搜庫時間组题，還會引入錯誤葫男；如果是ETD碎裂則會產(chǎn)生cz離子，而QTOF會產(chǎn)生ax離子崔列。搜庫軟件通常會根據(jù)我們指定的儀器類型來自動判斷碎片離子的類型梢褐。
5） 選擇合適的搜庫軟件：接下來詳聊。
小編明白赵讯，大伙兒通常都比較關心用哪款搜庫軟件盈咳，能最快最好地解決自己的問題。根據(jù)課堂上學到的內(nèi)容边翼，小編給大伙兒逐一介紹目前最常用到的搜庫軟件鱼响，以及它們各自的特點。
首先出場的是世界上第一款搜庫軟件SEQUEST组底！雖然幾經(jīng)升級更新丈积，它仍然保留了最初設計時的基本架構，并且仍然被廣泛使用斤寇。SEQUEST的思路主要分兩步走：先對匹配結果給出一個預打分桶癣，然后再通過全局的評估打出最后得分。目前整合了SEQUEST搜庫方法的軟件還有Proteome Discovery娘锁、X!Tandem牙寞、Comet等。
第二款軟件是被認為是目前世界上使用最為廣泛的搜庫工具Mascot，由英國Matrix Science公司研發(fā)(www.matrixscience.com间雀，國內(nèi)的代理商為康昱盛公司)悔详。它與SEQUEST的搜庫算法完全不同，是基于概率的打分惹挟。它之所以廣愛歡迎茄螃，主要有以下幾個特點：
1） 能給出清楚明了的搜庫結果報告；
2） 對蛋白的鑒定率很高连锯；
3） 可以整合和分析幾乎所有主流的質譜儀器原始數(shù)據(jù)归苍；
4） 搜索速度很快。
還有一款開源軟件也值得介紹給大家：X!Tandem运怖。它的打分算法其實與SEQUEST是一樣一樣的拼弃，但搜庫速度相當快，近年來用戶數(shù)增長很顯著摇展，感興趣的小伙伴們可以訪問以下網(wǎng)站獲取更多的信息：www.thegpm.org
除了以上三種搜庫軟件吻氧，目前我們能看到的類似的工具還有很多很多，比如Comet, OMSSA, InsPecT, MyriMatch, Phenyx, SpectrumMill, ProteinPilot等等咏连。其實這些軟件的處理步驟都是搜庫和打分盯孙，但它們所使用的算法思路又各不相同。推薦給大伙兒的做法是祟滴，選擇兩個基于不同算法的搜庫軟件振惰，分別進行打分，然后將結果合并踱启，可以得到比單用一種搜庫算法高一些的鑒定結果报账。
搜庫流程
說到底，搜庫軟件在報告最終的匹配結果之前埠偿，到底都做了些什么操作呢？
首先榜晦，把質譜儀得到的譜圖輸入搜庫軟件冠蒋。對于搜庫軟件來說，碎片離子的信息越豐富越好乾胶。如果最后給出的搜庫結果不好抖剿，建議大伙兒點開二級譜圖檢查一下，是否因為碎片信息太少而造成的识窿，或者是因為二級碎片的intensity太低斩郎。
大伙兒要記得，二級碎片的信息主要是用來做蛋白序列信息推導的喻频，如果二級譜圖給我們的信息太少缩宜，就很難做出一個好的鑒定結果。二級譜圖質量不高有各種可能的原因，比如樣品本身的原因锻煌，或者質譜儀的原因妓布，這個要根據(jù)實際情況來逐一排查。
（對于我們這些小白來說宋梧，如果你拿到搜庫軟件只會點點鼠標匣沼，那就是入門一級的水平，如果你還會打開二級譜圖查看一番捂龄，那就升到二級了_ 這也是為啥雖然并不需要自己寫搜庫軟件释涛，咱們還是要學習一下搜庫原理。）
除了譜圖倦沧，還將讀入母離子及電荷狀態(tài)等信息唇撬，這些都存儲于RAW文件中，所以我們只需要輸入RAW文件刀脏，并指定之前談到的五個變量局荚，就可以開始搜庫了。
搜庫軟件通過以下五步來實現(xiàn)譜圖的正確匹配：
1） 從數(shù)據(jù)庫中選擇分子量與輸入值相等的肽段愈污；
2） 生成理論碎片耀态，并生成理論譜圖；
3） 將實驗譜圖與理論譜圖進行匹配暂雹；
4） 對匹配進行打分首装；
5） 將打分進行排序，通過統(tǒng)計學分析杭跪，確定最佳的匹配結果并導出仙逻。
來，我們看一張形象點的圖涧尿，再來理解一下這五步到底是怎么實現(xiàn)的系奉。
假設我們的譜圖檢測到的是一條1000分子量的肽段，則搜庫軟件首先會在蛋白序列數(shù)據(jù)庫里對所有可能的蛋白序列進行特定位點的酶切（酶切位點由我們指定的特異性酶參數(shù)來決定）姑廉，然后選出分子量1000左右的肽段缺亮，根據(jù)指定的儀器類型，模擬打碎成理論上的碎片離子桥言，然后生成理論譜圖萌踱，再與輸入的實際譜圖進行比對，得到一個相似性打分号阿，按得分高低進行排序并鸵，最后挑選出匹配結果。
鑒定結果評估
聽上去整個過程并不復雜扔涧，對不對园担？事實上，由于各種因素對搜庫匹配的影響，這里面最重要的問題是粉铐，怎么判斷哪些鑒定結果是對的疼约！也就是說，我們需要對匹配結果進行評估蝙泼。
在過去程剥，評估的大部分工作需要手工完成。下面這個餅圖大伙兒感受一下：整個樣品制備+質譜實驗+數(shù)據(jù)庫搜索只占了25%的時間汤踏，而對結果的手工驗證要花掉75%的時間织鲸！是不是很可怕！
還好溪胶，我們已經(jīng)不用再受這種折磨了搂擦，如今的各種搜庫軟件都自帶統(tǒng)計學算法來幫我們進行評估，幸福感頓時提升了好幾個數(shù)量級哗脖！
目前主流的統(tǒng)計學評估算法有兩種思路：
1） target-decoy 也就是通常所說的正庫反庫策略
2） peptideprophet 基于概率的打分
感興趣的童鞋可以翻看我們之前的推文瀑踢，專門對蛋白鑒定的統(tǒng)計學指標進行詳細的介紹：
p值、E值才避、FDR橱夭、q值
p值、E值桑逝、FDR棘劣、q值續(xù)
以上內(nèi)容是針對蛋白定性檢測的，小伙伴們都看懂了嗎楞遏？來茬暇，打起精神，我們接下來繼續(xù)聊更為重要的蛋白定量檢測寡喝！
二糙俗、蛋白定量檢測
為什么要做定量，這個大概不用小編多啰嗦了吧预鬓？總之臼节，定量檢測可以研究不同生理狀態(tài)及不同時間點上各種蛋白表達量的變化，研究意義是大大的有吧好蟆！
在質譜史前時代巨税，是2D膠的天下蟋定。前面也提過，2D膠的通量草添、準確性以及可重復性都沒法跟質譜比驶兜。
說到利用質譜對蛋白進行定量檢測，可以分為基于MS1（一級譜圖）的定量，以及基于MS2的定量抄淑。啥意思呢屠凶？基于MS1的定量是指根據(jù)一級譜圖的信息得到定量結果，同理肆资，基于MS2的定量是指根據(jù)二級譜圖的信息得到定量結果矗愧。聽上去很高深吧？別怕郑原，聽小編逐一給你解釋唉韭。
基于MS1的定量
基于MS1的定量方法最早是ICAT（ICAT是標記試劑的名字，這種定量方法現(xiàn)在用得很少了）犯犁，現(xiàn)在常用的SILAC属愤，以及l(fā)abel free非標記定量。我們來說說SILAC定量策略酸役。
SILAC（Stable Isotope Labeling Strategies）翻譯過來就是穩(wěn)定同位素標記技術住诸，說得簡單一點，就是想辦法把非天然同位素摻到肽段里代替天然同位素涣澡，然后計算譜圖里各個同位素的峰面積贱呐，其差值就對應著蛋白相對量的變化。
通常呢暑塑，我們是利用C13或者N15這類穩(wěn)定的同位素（叫做重標）吼句，用培養(yǎng)基或者飼料對細胞或者實驗動物進行培養(yǎng)或喂食。大伙兒應該知道吧事格，有一類氨基酸叫必需氨基酸惕艳，比如Lys和Arg，是生物體自身無法合成的驹愚，需要從外界攝入远搪。于是，從外界攝入的過程中逢捺，Lys和Arg里包含的C12或N14谁鳍，就被C13或N15取代了。
妙的是劫瞳，Lys和Arg又正好是胰蛋白酶的酶切位點倘潜，所以它又能保證每條切出來的肽段至少有一個Lys或Arg，也就是說志于，每條肽段上至少有一個殘基是有同位素標記的涮因，完美！
SILAC的標記效率很高伺绽，比如細胞培養(yǎng)养泡，通常5嗜湃、6代以后，同位素標記就有95%左右的比例了澜掩。重標標記好后购披，將沒有同位素標記的樣品（通常叫輕標）與重標的樣品1：1混合，經(jīng)過分離肩榕、酶切等步驟刚陡，進入質譜檢測。得到的譜圖會有對應的兩個峰点把，峰面積的差值就是不同樣品中相應蛋白的相對量的變化了橘荠。
所以，SILAC定量是一種相對定量方法郎逃，我們只能得到兩組樣品之間每種蛋白含量的差異值哥童，而無法知道它們的絕對量。
如果你有三組樣本想要進行SILAC定量褒翰，我們可以把C13和N15標記組合一下贮懈，比如輕標（不標記）、中標（C13標記）和重標（C13和N15共同標記）优训，然后三組樣品1：1：1混合朵你。
怎么把同位素標記上去這件事情，方法有很多揣非，可以分為代謝同位素標記抡医，化學方法標記，酶反應標記早敬。比如我們剛才舉例的細胞培養(yǎng)忌傻，就屬于代謝同位素標記，這也是其中最常用的方法搞监；通過化學反應在特別的肽段上加一個基團這種方法叫做化學方法標記水孩；酶切的時候在斷裂位點標記這種方法在酶反應標記（通常使用O18同位素）
剛才小編在講到SILAC定量時，云淡風輕地提到峰面積琐驴。有沒有童鞋對“峰面積”到底是什么心存疑惑呢俘种？小編用一張圖告訴你：
上圖是在時間軸上從一級質譜得到的多張譜圖，在荷質比軸上的每一根小柱子代表的是肽段在不同時間點上被檢測到的值绝淡，我們用黃色小柱子表示其中一種肽段宙刘，將這四個黃色小柱子的頂點連起來，就可以畫出一個峰型牢酵，這個峰的面積就是肽段的量（通過若干肽段的量我們可以推出蛋白質的量）荐类。
對這個圖，小編的理解是茁帽，假設質譜掃描的速度是無限地快玉罐，相當于可以把一個時間段分為無數(shù)個時間點，每個點上都能掃描得到一個值（小柱子）潘拨，然后在時間軸上把這些值全部加起來（做積分）于是就得到了這個肽段的量吊输。
基于MS2的定量
扯完了基于MS1的定量，我們繼續(xù)扯基于MS2的定量铁追，也就是基于報告離子的定量季蚂。在Shotgun領域主流的方法是iTRAQ和TMT，不要被這些名字嚇到琅束，其實就是兩種試劑的名字扭屁，而且原理和操作方法都差不多。以iTRAQ為例涩禀，先來一張清新的示意圖洗洗眼：
圖的左側就是iTRAQ試劑的分子式料滥，如果你覺得太小了看得不爽，那小編再來貢獻一張更大更簡明的：
大伙兒看懂了嗎艾船？iTRAQ試劑分三個部分：報告離子（就是最終要進入二級質譜進行檢測的）葵腹、平衡離子（連接報告離子與反應離子），以及與肽段反應的反應基團屿岂。
說起來践宴，這個iTRAQ試劑也是很妙的，它這三個基團里含有一堆同位素爷怀，每種同位素的總量是一個固定的值阻肩，但具體位置可以變化，主要體現(xiàn)在報告離子上的變化运授，于是我們可以得到幾種不同的報告離子烤惊。
說得詳細點兒，假設（只是假設哈）徒坡，我們同時用了四個C13撕氧，四個N15來標記整個iTRAQ分子，無論這四個C13和四個N15的位置有多么不同喇完，大家總的分子量都是一樣的伦泥。但對于報告離子來說，可以有變化锦溪，比如第一個報告離子被標記了一個C13不脯，第二個報告離子被標記了一個N15，第三個標記了C13+N15刻诊，第四個標注記C13+C13+N15.
由于可以做這樣的位置組合防楷，我們常聽到的iTRAQ“四”標或者“八”標，就是指標記位置的不同組合的數(shù)量则涯。以四標為例复局，在MS1時就通過iTRAQ試劑中的反應基團將整個iTRAQ試劑標記在肽段上冲簿，這里面包含了四種同位素標記的組合，但由于它們總的分子量都相同亿昏，對樣品不會產(chǎn)生什么影響峦剔。
好，接下來我們將標記好的樣品送入二級質譜角钩，經(jīng)過與惰性氣體的碰撞碎裂吝沫，iTRAQ試劑會按它固定的方式將報告離子碎裂出來，于是递礼，四種標記位置不同的iTRAQ試劑碎裂后惨险，得到四種分子量不同的報告離子！將這四種報告離子混合以后得到譜圖脊髓，根據(jù)譜峰面積可以推導它們各自標記的肽段的量辫愉。是不是很機智的一種方法？
我們還是以四標為例供炼，報告離子的荷質比分別是114一屋，115，116袋哼，117冀墨，于是，在二級譜圖的110-120的范圍里涛贯，我們會看到一個與by離子完全不同的非常高的峰诽嘉，就像這樣：
這就是iTRAQ方法標志性的峰！把這個峰放大弟翘，我們就能清楚地看到四個峰虫腋，就是對應的四個通道。像下面這樣：
Tips：用iTRAQ方法定量的時候稀余，質譜儀的參數(shù)需要根據(jù)試劑碎裂時的碰撞能量進行優(yōu)化悦冀，就是說，要將報告離子充分地碎裂出來睛琳，才能保證它可以被穩(wěn)定可靠地檢測盒蟆。
大伙兒如果能基本理解iTRAQ四標的原理，對于iTRAQ八標师骗，TMT六標或者十標历等，都可以類推了。只需要注意的是辟癌，iTRAQ與TMT試劑來不同的質譜儀公司寒屯，因此對質譜儀也有選擇性的，大家在選擇到底用哪種標記試劑的時候黍少，除了要考慮標記的樣本數(shù)寡夹，也要考慮對應的質譜儀品牌和類型了处面。
三、靶向蛋白質組學
前面我們聊過了蛋白質組學的定性檢測與定量檢測要出，接下來我們整點兒更前沿的鸳君，代表著未來一個重要發(fā)展方向的東西：靶向蛋白質組學！
話說患蹂，在精準醫(yī)學如火如荼的今天，最能代表有機體當下生命狀態(tài)的蛋白質組學砸紊，如何大規(guī)模地應用于生物醫(yī)學領域呢传于？與基因組學相比，蛋白質組學目前的瓶頸到底在什么地方呢醉顽？
簡單說來沼溜，蛋白質組學的著力點一直是研發(fā)更高通量的技術平臺，發(fā)現(xiàn)更多未知的蛋白游添。當我們轉身關注生物醫(yī)學領域時才發(fā)現(xiàn)系草，人家并不需要一次檢測上萬個蛋白這么高的通量，但是卻需要在大量的樣本中唆涝，高度穩(wěn)定地重復地檢測幾十個幾百個蛋白找都。
比如說，當我們試圖把蛋白質組學研究手段用于臨床生物標志物的研發(fā)時廊酣，走到第二步就卡住了能耻！要在上百個樣本中重復檢測一些候選標志物蛋白質，真的很困難巴龀邸晓猛！
這種困難是什么造成的呢？最重要的原因是凡辱，也就是 Shotgun方法的局限性戒职，它只適合檢測高豐度蛋白，含量不夠高的蛋白很容易漏檢透乾，而這些卻往往是真正可能的生物標志物洪燥。此處請大家腦補一下小編介紹DDA（數(shù)據(jù)依賴性采集）時提到的，低豐度蛋白進入二級質譜的機會都很少续徽！對于低豐度蛋白蚓曼，可能出現(xiàn)的結果就是，一會兒檢測到了钦扭，一會兒又檢測不到…這叫人怎么忍纫版？
以血液中包含的蛋白為例，大家感受一下客情，紅色的都是非候選標志物其弊，但含量都非常高癞己。余下的低豐度蛋白我們又搞不定。這么看來梭伐，對于臨床應用痹雅，蛋白質組學還有希望嗎？
2012年糊识，一種新的方法被nature method選為年度新方法绩社，認為是未來發(fā)展的大趨勢，它的名字就叫靶向蛋白質組學赂苗！于是愉耙，希望來了~
靶向蛋白質組學技術到底是怎樣的不同？它大體上可以分為幾類：MRM/SRM拌滋、PRM朴沿、SWATH/DIA。大伙兒就跟著小編來了解一下其中兩種比較有代表性的吧~
MRM/SRM
先來名詞解釋一下：
SRM：Selective Reaction Monitor（選擇反應監(jiān)測）败砂，就是先只選擇一個肽段離子赌渣，碰撞后，從形成的碎片離子中也只選一個離子昌犹，進行檢測坚芜。因為兩步都只選單離子，針對性很強祭隔，可以排除噪音和干擾的影響货岭。
MRM：Multi Reaction Monitor（多反應監(jiān)測）就是多個化合物同時測定時，多個SRM一起做疾渴。不需要特意區(qū)分SRM和MRM千贯，只要一次實驗是同時做幾個SRM，就是MRM方式了搞坝。
概括來說搔谴，由于MRM/SRM預先選定了需要分析的肽段及碎片離子，而不像之前的方法桩撮，眉毛胡子一把抓敦第，這樣可以繞過一級質譜中只能選擇高峰度Tops的標準，從而保證低峰度蛋白可以不受影響店量。
第一篇MRM/SRM應用的文獻于2009年發(fā)表在CELL上的芜果，對酵母全蛋白組做了精確定量，覆蓋了從1E6 copies/cell 到100 copies/cell的蛋白融师，無一遺漏右钾，是不是很贊！（Cell 138, 795-806, Auguest21, 2009）
另一個激動人心的應用發(fā)表于2013年，利用MRM/SRM技術成功研發(fā)出肺癌篩選的試劑盒舀射，從371個候選蛋白中選出13個蛋白的panel作為檢測目標窘茁。該試劑盒已得到美國FDA批準，在美國上市使用脆烟，進入醫(yī)保支付范圍山林。感興趣的小伙伴們可以找文獻來研讀一下（Sci Transl Med 5, 207ra142, 2013）.
還有一種與MRM/SRM很類似的方法，叫PRM邢羔。它唯一的不同是驼抹，MRM/SRM的母離子和子離子都需要預先選定，而PRM只需要選定母離子拜鹤，而不需要預選子離子砂蔽。這是因為PRM是在高精度的Orbitrap質譜儀上做（MRM/SRM是在三重四級桿質譜儀上做），由于精度夠高署惯，可以對多種子離子同時進行準確的測定。由于不需要選定子離子镣隶，PRM方法實施起來更容易极谊，而MRM/SRM則需要針對子離子不斷優(yōu)化儀器參數(shù)。
DIA
MRM之類的技術安岂，需要預先選定多肽及肽段離子轻猖，那么問題就來了，如果我們想發(fā)現(xiàn)點新的東西呢域那？我沒法預先選定傲摺！
這種情況下次员，你需要關注的就是第二種代表性的靶向蛋白質組學技術DIA（data-independent acquisition）了败许，也就是“數(shù)據(jù)非依賴性采集”策略。
DIA的一個代表性方法叫SWATH技術（由蛋白質組學泰山北斗Ruedi教授所在的蘇黎世聯(lián)邦理工學院與AB SCIENX公司合作將這個方法商業(yè)化）淑蔚。它的基本思路是：選擇母離子的質荷比m/z在500-900或400-1000左右的范圍內(nèi)市殷，每25Dal作為一個窗口，比如刹衫，先分離500-525這個范圍的肽段醋寝，然后碎片化，接下來采集525-550分子量范圍的肽段带迟，依次類推音羞。
DIA的一級質譜可以很均勻地采集每個范圍窗口的肽段，不會有遺漏仓犬，不涉及到對母離子的限制性篩選嗅绰，所以無論是準確性還是可重復性，與DDA相比都得到了很好的提升，前途一片大好办陷！
不過呢貌夕，細心一點的童鞋就會發(fā)現(xiàn)，DIA一次采集的范圍有25DAL民镜，顯然是很寬的了啡专！這就意味著，每一次放進來的肽段會很多制圈，產(chǎn)生的碎片離子也非常復雜们童，于是我們會拿到非常復雜的譜圖。
如果用以往的搜庫方法鲸鹦，拿理論譜圖去匹配這么復雜的真實譜圖慧库，很容易漏掉很多信息，準確率沒法保證馋嗜。怎么辦呢齐板？DIA的策略是，先收集真實的譜圖庫葛菇，然后拿實驗譜圖與真實譜圖庫進行比對甘磨，來鑒定肽段。
當然啦眯停，即便如此济舆，DIA復雜的譜圖仍然給后續(xù)的數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計學檢驗帶來很多挑戰(zhàn)，也激起了各種大神的興趣莺债！在這一兩年的各種蛋白質組學會議上滋觉，如果大伙兒留意的話，會發(fā)現(xiàn)對DIA數(shù)據(jù)分析的技術討論是相當?shù)幕馃崞氚睿∥覀円财诖鳧IA領域的突破和發(fā)展椎侠！
好了，第一課的學習內(nèi)容就分享到這里了侄旬。再次感謝授課老師庫鑫博士深入細致的講解肺蔚，也謝謝各位小伙伴們的陪伴！
