在分析基因組數(shù)據(jù)時(shí)改淑,我們有時(shí)候只需要基因組中某個(gè)部位的信息碍岔,比如涉及編碼蛋白功能就只需要CDS序列,研究miRNA與mRNA互作時(shí)溅固,只需要3‘UTR序列付秕,那么如何簡(jiǎn)單快速的得到基因組中的目標(biāo)序列呢?今天就要用一個(gè)好用的數(shù)據(jù)分析工具TBtools侍郭。
一询吴、準(zhǔn)備基因組注釋文件以及序列文件:1、可從NCBI亮元、ENSEMBL猛计、GENCODE等數(shù)據(jù)庫(kù)中下載,本文以ensembl為例爆捞,打開ensembl數(shù)據(jù)庫(kù)奉瘤,進(jìn)入Downloads,點(diǎn)擊Downloading with rsync煮甥, Ensembl FTP site 選擇發(fā)布的基因組版本盗温,以最新版本99為例
2、選擇fasta和gff3成肘,選擇物種卖局,下載基因組序列文件和gff注釋文件。比如homo双霍,在序列下載時(shí)選擇primary或top均可砚偶,不要選rm和soft,會(huì)降低比對(duì)率(下載工具就不多說啦)
二洒闸、TBtools序列提取
1染坯、準(zhǔn)備好基因注釋文件gff和序列文件fasta后,下載TBtools:https://github.com/CJ-Chen/TBtools丘逸,安裝单鹿。
2、打開TBtools深纲,進(jìn)入sequence toolkit羞反,GFF3/GTF Manipulate,GXF Sequences Extract
3囤萤、首先,分別導(dǎo)入GFF文件和FASTA序列文件是趴,再點(diǎn)擊initialize涛舍,初始化文件。初始化完成后唆途,會(huì)跳出一個(gè)幫助用戶選擇feature的框富雅,可直接關(guān)掉跳過(不懂GFF注釋結(jié)構(gòu)的童鞋可以看一下 哈哈)掸驱,然后軟件的Feature Tag就會(huì)出現(xiàn)以下可供選擇的序列區(qū)域啦,包括mRNA没佑,Lnc_RNA毕贼,CDS、3’UTR等蛤奢,可自行選擇提取鬼癣。
注意:因?yàn)門Btools有特定的函數(shù)程序,所以提取之前需提前設(shè)定好輸出的文件名啤贩,也就是在set an output fasta file出待秃,除了選擇輸出目錄外。還需手動(dòng)添加需要輸出的文件名(.fa)痹屹,最后章郁,Start就可以啦,幾分鐘之后就可以在輸出目錄下找到你的序列了志衍。是不是特別簡(jiǎn)單暖庄?^-^