本方案(Chomczynski1993) 可以從部分組織或細(xì)胞中同時提取RNA 董虱、DNA 和蛋白質(zhì)。像它的前身(Chomczynski
and Sacchi 1987) 一樣申鱼，此方法涉及用異硫氰酸胍和苯酚的單相溶液裂解細(xì)胞愤诱。加入氯仿產(chǎn)生第二（有機(jī)）相捐友，從而DNA
和蛋白質(zhì)被抽提，而RNA留在水相上清中匣砖。有機(jī)相中DNA 和蛋白質(zhì)的分離，通過按順序用乙醇猴鲫、異丙醇進(jìn)行沉淀对人。從有機(jī)相中回收的DNA 是20kb
大小、適合進(jìn)行PCR 反應(yīng)的模板拂共。蛋白質(zhì)由于暴露在胍中牺弄，而變性則主要用于免疫反應(yīng)匣缘。用異丙醇從水相中沉淀出的RNA
可通過色譜法在寡核苷酸-纖維素柱進(jìn)一步純化和/或用于Northern 雜交、反轉(zhuǎn)錄或RT-PCR 肌厨。
總RNA 的產(chǎn)率因組織或細(xì)胞來源而異培慌，但一般而言，組織的初始產(chǎn)量為4~7μg/mg ,細(xì)胞為5 ~ 10 mg/107個細(xì)胞柑爸，所提取的RNA 的A260/A280比值為1.8 ~ 2.0 吵护。
材料
準(zhǔn)備本方案中的所有試劑均需要用DEPC 處理的水。
試劑
細(xì)胞或組織
氯仿
DEPC 處理過的水
十五水?dāng)Q檬酸二鈉( 0.8mol/U） 不需調(diào)整pH 馅而。
乙醇（75%)
異丙醇
液氮
單相裂解試劑
氯化鈉( 1.2 mol/L)
磷酸鹽緩沖鹽水(PBS) 譬圣，冰冷（可選瓮恭，見步驟1)僅適用于重懸和單層細(xì)胞生長所需的厘熟。
RNA 沉淀溶液
SDS (20%, m/V) （可選，見步驟7 )
設(shè)備
用于測量在260nm 處吸光度的比色皿
組織勻漿器
低中速離心機(jī)和轉(zhuǎn)子
DEPC 處理水清洗過的研缽和杵绳姨，預(yù)冷
聚丙烯帶封蓋的管
65°C 水浴（可選飘庄，見步驟7)
方法
1.準(zhǔn)備細(xì)胞或組織樣品提取RNA 。
對于組織樣品
處理含有豐富的蛋白質(zhì)分解酵素的組織如胰腺或腸道時跪削，最好將組織先切成小塊( 100mg ) ，然后直接放入液氮中狞甚。快速冷凍的組織可以被轉(zhuǎn)移到－70°C 保存或立即用于提取RNA ?哼审。組織可以存儲于－70°C 數(shù)月而不影響RNA的產(chǎn)量或完整性孕豹。
冷凍和粉碎并不是必需的涩盾。不含有豐富的RNase 的組織可以被迅速剁碎成小塊励背，并直接轉(zhuǎn)入加有適量溶液D （步驟l.iii ) 的聚丙烯snap-cap 管中。
i 分離出所需組織叶眉，并立即將它們放置在液氮中芹枷。
ii 將約100mg 的冷凍組織轉(zhuǎn)移到含有液氮的研缽中莲趣，并用杵粉碎。在粉碎過程中添加液氮以保持組織的冷凍狀態(tài)喧伞。
iii . 轉(zhuǎn)移粉狀組織至還有l(wèi)mL 冰冷單相裂解試劑的聚丙烯snap-cap 管中走芋。
iv 在室溫下用Polytron 勻漿器勻漿組織15~30s 。
對于懸浮培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞
i 通過200 ~ 1900g 離心5 ~ 10min 收獲細(xì)胞翁逞。
ii 棄培養(yǎng)基溉仑，用1 ~ 2mL 的無菌冰冷PBS 重懸細(xì)胞沉淀挖函。
iii 通過離心收集細(xì)胞浊竟，棄去PBS, 按每106個細(xì)胞加lmL 單相裂解試劑比例加入單相裂解試劑。
iv 在室溫下用Polytron 勻漿器勻漿組織15 ~ 30s 逐沙。
對于單層哺乳動物細(xì)胞
i 棄去培養(yǎng)基，并用5~10mL 無菌冰冷的PBS 漂洗細(xì)胞一次棚赔。
ii 棄去PBS, 按一個90mm 培養(yǎng)皿加入lmL 單相裂解試劑比例加入單相裂解試劑裂解細(xì)胞（每60mm 培養(yǎng)皿0.7mL) 徘郭。
iii. 細(xì)胞裂解液轉(zhuǎn)移到聚丙烯snap-cap 管中靠益。
iv . 在室溫下用Polytron 勻漿器勻漿組織15 ~ 30s 残揉。
2.在室溫下孵育5min, 以完全分離核蛋白復(fù)合物。
3.每毫升單相裂解試劑添加0.2mL 氯仿抱环。劇烈振動或渦旋以混合樣品。
4°C 以12000r/min 離心15min, 分離成兩相的混合物眶痰。將上層水相轉(zhuǎn)移到新的管中梯啤。
DNA 和蛋白質(zhì)提取到有機(jī)相中竖伯， RNA 留在水相中。DNA 和蛋白質(zhì)可能通過順序用乙醇祟偷、異丙醇沉淀打厘，并從有機(jī)相中回收
?? 5 . 從水相中沉淀的RNA : 對于每個初始毫升的單相裂解試劑修肠，加入0.25 倍體積的異丙醇和0 .2 5 倍體積沉淀RNA 溶液婚惫。徹底混合后魂爪，室溫下放置10min 。
微型離心機(jī)4 °C 以最大的速度離心10min 收集沉淀出的RNA 滓侍。用75％乙醇洗滌沉淀兩次，再離心捺球。用一次性吸頭清除殘留的乙醇。敞開放置數(shù)分鐘使乙醇揮發(fā)氮兵，不要讓沉淀完全干燥歹鱼。
6.加入50~100mL DEPC 處理過的水泣栈， -70℃ 儲存RNA 溶液弥姻。
7.加入0.5 % SDS, 然后加熱至65℃ 可協(xié)助溶解沉淀。
? 8.估計RNA 的濃度庭敦。
