生物樣品中代謝物的測定方法有很多種，一般可分為直接定量法茎匠、代謝產物水解后通過母體藥物間接定量法或利用藥物與其代謝物之間的響應因子定量法厚棵。
直接定量法
直接定量法是測定生物樣品中代謝物的最合適方法超凳，但需要考慮以下兩點：
[if !supportLists]1.?[endif]一般情況下侨糟，代謝物比母體藥物更具親水性税朴，尤其是葡萄糖醛酸回季。這使得直接測定代謝物的難度加大，因為大多數情況下正林，這些極性分析物和干擾基質成分之間是無法實現(xiàn)色譜分離的泡一。然而，液相色譜串聯(lián)質譜儀的出現(xiàn)克服了這一問題觅廓，它可以實現(xiàn)代謝物的直接定量鼻忠。由于LC-MS/MS具有快速、特異性強杈绸、靈敏度高等特點粥烁，在藥代動力學和代謝研究中發(fā)揮著重要作用。
[if !supportLists]2.?[endif]生物樣品中代謝物定量的可靠性和準確性需要合適的對照標準物質蝇棉。在分析方法的驗證中讨阻，使用合適的對照標準物質在給定的生物樣品中制備校準和對照樣品。一些代謝物標準品通常在市場上無法買到篡殷，尤其是新藥或濫用藥物的情況钝吮。此外，現(xiàn)有的代謝物標準品可能非常昂貴板辽，因此并非每個研究小組都能獲得奇瘦，尤其是學術領域。在使用LC-MS/MS分析時劲弦，推薦使用穩(wěn)定同位素標記的代謝物標準品耳标，但其可能比未標記的代謝物更貴。
這時候邑跪，有人可能會問：為什么不根據母體藥物的標準曲線來定量代謝物的濃度次坡？因為這個標準曲線是隨時可以獲得的。在不同的液相色譜檢測系統(tǒng)中画畅，代謝產物結構的改變會對檢測結果產生不同程度的影響砸琅。即使結構變化很小，采用大氣壓電離源進行質譜分析也很容易出現(xiàn)這一問題轴踱。有報道稱症脂，兩種化學式相同的氧化異構體代謝物在ESI-MS中的響應因因子不同，或在ESI的正離子模式中未檢測到與母體藥物不同信號，只有在負離子模式下才檢測到這些化合物诱篷。有時代謝物與母體藥物具有相同的發(fā)色團壶唤，則一般不使用紫外檢測。但這項技術在藥代動力學研究中的主要局限性在于靈敏度和選擇性太低棕所，因為某些代謝物在波長處沒有紫外吸收闸盔，無法將其與背景區(qū)分開來。如果使用電化學檢測橙凳，其響應也可能對代謝物的結構有很大的依賴性，尤其是對于I相代謝物笑撞，與母體藥物相比岛啸，通常其氧化還原性發(fā)生了變化。此外茴肥，這兩類屬于選擇型檢測器坚踩，適用性有限.
在沒有合適標準的情況下，也可以進行直接定量瓤狐。為此瞬铸，檢測器需要給出所有目標化合物的摩爾響應值。此外础锐，該檢測器應具有靈敏度高嗓节、動態(tài)范圍寬、堅固耐用和易與操作皆警、與反相色譜梯度洗脫兼容拦宣、不易受基質干擾等特性。雖然可以使用更高級的檢測器信姓，但其中很少有可用于代謝物定量的鸵隧。最近，F(xiàn)DA出臺了關于代謝物安全性測試的指南意推，該指南建議所有大于母體藥物10%的代謝物都應進行檢測豆瘫，大家感興趣的話，可以去找來看看菊值。
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參考資料：Roskar, Robert , and T. Trdan . Analytical Methods for Quantification of Drug Metabolites in Biological Samples. Chromatography - The Most Versatile Method of Chemical Analysis. 2012.
