操作步驟? （請自行準(zhǔn)備無水乙醇哮针、異丙醇、滅菌 1.5mL 離心管） ：
1. 取出洗滌液，按以下操作：
a) 洗滌液 A：按終濃度 30%比例加入無水乙醇十厢，如 7mL 加入 3mL 無水乙醇等太；21mL 加入 9mL 無水乙醇，充分混勻蛮放。
b) 洗滌液 B：按終濃度 70%比例加入無水乙醇缩抡，如 3mL 加入 7mL 無水乙醇；9mL 加入 21mL 無水乙醇包颁，充分混勻瞻想。
c) 配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀，可在 37℃溶解娩嚼，搖勻后使用蘑险。
2. 取 1.5mL 離心管，加入 200μL 細(xì)胞樣本岳悟，再加入 180μL 裂解液及 20μL 消化液漠其，振蕩混勻，65℃水浴 10 分鐘竿音。
3. 加入 400μL 異丙醇和屎，混合均勻，如有半透明懸浮物春瞬，不影響 RNA 的提取與后續(xù)實(shí)驗柴信。
4. 將吸附柱放入收集管內(nèi)，將上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi)宽气，12,000 rpm 離心 1 分鐘随常，棄收集管內(nèi)廢液；
5. (可選步驟萄涯，去除DNA) 取 RNase-free 離心管 1 只绪氛，每份需去除 DNA 的提取樣本分別加入 10x DNase I Buffer 6μL、RNase-free ddH2O52μL 涝影、RNase-free DNase I2μL枣察，輕輕手振混勻，勿劇烈震蕩燃逻。用移液器在每份提取樣本的吸附膜中央加入 60μL 上述配制好的 DNase I反應(yīng)液序目，室溫放置 15min。
6. 將吸附柱放回收集管內(nèi)伯襟，加 500μL 洗滌液 A 至吸附柱內(nèi)猿涨，靜置 2 分鐘，12,000 rpm 離心 1 分鐘姆怪，棄收集管內(nèi)廢液叛赚。
7. 將吸附柱放回收集管內(nèi)澡绩，加 500μL 洗滌液 B 至吸附柱內(nèi)，靜置 2 分鐘俺附，12,000 rpm 離心 1 分鐘肥卡，棄收集管內(nèi)廢液。
8. 按每份樣本 40μL 取洗脫液（如 10 份提取樣本昙读，即取 400μL 洗脫液）召调，放置于滅菌 1.5mL 離心管膨桥，65℃預(yù)熱蛮浑。
9. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，12,000 rpm 離心 2 分鐘只嚣，離去殘留的洗滌液沮稚。
10. 取出吸附柱，放入新的 1.5 mL 滅菌離心管內(nèi)册舞，在吸附柱中心加入 40 μL 預(yù)熱洗脫液蕴掏，靜置 2 分鐘，12,000 rpm 離心 1 分鐘调鲸，收集 RNA溶液盛杰。提取的 RNA 即可用于下一步實(shí)驗或-70℃保存。
注意事項：
1. 裂解液含有刺激性化學(xué)物質(zhì)藐石，操作過程請做好防護(hù)措施即供，避免直接接觸皮膚，防止吸入口鼻于微。
2. 由于 RNA 容易降解逗嫡，提取實(shí)驗所用器具應(yīng)除去 RNA 酶，實(shí)驗過程中最好戴一次性潔凈手套株依、口罩驱证，提取的 RNA 溶液可適當(dāng)加入 RNA保護(hù)因子。
3. 洗滌液加入乙醇后要充分混勻恋腕，最好現(xiàn)用現(xiàn)配抹锄，每次根據(jù)所要提取的樣本量計算后適量配制。
4. 所用細(xì)胞量建議不高于 10 7 荠藤，洗滌液在使用前請加入無水乙醇后充分混勻祈远。
