高通量細(xì)胞計數(shù)儀的基本原理是將待檢樣品通過流式系統(tǒng)連續(xù)傳送到光學(xué)檢測區(qū)域帚桩,采用一定的探測器對細(xì)胞進行激發(fā)并測量細(xì)胞在不同光學(xué)參數(shù)下的特性亿驾。具體步驟如下:
1.激發(fā)光源:使用激光或LED等光源產(chǎn)生單一或多種波長的光。這些光將通過光束整形系統(tǒng)账嚎,使其獲得理想的光束形狀莫瞬。
2.樣品注射:樣品通常被稀釋并加入試劑,以保證細(xì)胞在流動時不會黏連在一起郭蕉。樣品通過注射器被注入到裝有緩沖液的注射器中疼邀,并通過壓力控制一定的流速。
3.水平排列:通過加速流體以及流體的層流自動調(diào)整召锈,使細(xì)胞在流動時保持單個旁振、水平排列的狀態(tài),方便激發(fā)光的入射和測量涨岁。
4.激發(fā)和測量:選擇特定的濾光片拐袜、光柵和透鏡組合來引導(dǎo)激發(fā)光通過細(xì)胞,并測量光的散射梢薪、發(fā)射蹬铺、吸收等特性。激發(fā)光在細(xì)胞表面相互作用并發(fā)生散射或激發(fā)產(chǎn)生熒光秉撇。根據(jù)光的強度兽泣、散射角度指厌、發(fā)射光的波長等參數(shù),可以推斷細(xì)胞的大小、形狀兵扬、顏色等信息瞒窒。
5.數(shù)據(jù)處理:收集到的數(shù)據(jù)將被發(fā)送到計算機進行處理利凑。計算機根據(jù)設(shè)定的閾值和標(biāo)準(zhǔn)道逗,對細(xì)胞進行計數(shù)、分類和分析瞎暑。各種特征數(shù)據(jù)可以通過軟件進行可視化顯示和輸出彤敛。
高通量細(xì)胞計數(shù)儀的應(yīng)用:
1.細(xì)胞培養(yǎng)過程中与帆,監(jiān)測細(xì)胞的生長情況和濃度變化。
2.通過細(xì)胞計數(shù)墨榄,可以估算細(xì)胞的增殖速度玄糟、存活率以及死亡率等。
3.評估藥物對細(xì)胞的影響袄秩,如細(xì)胞毒性測試阵翎、細(xì)胞增殖抑制實驗等。
4.臨床樣本的細(xì)胞計數(shù)和鑒定之剧,如血液檢測郭卫、尿液分析等。
5.評估病菌或微生物的濃度背稼,以判斷生物實驗室環(huán)境的安全狀況贰军。
6.也可以用于測量植物細(xì)胞的數(shù)量以及相關(guān)參數(shù),如細(xì)胞體積等蟹肘。
總的來說词疼,高通量細(xì)胞計數(shù)儀在生命科學(xué)的研究和實驗中有著廣泛的應(yīng)用,可以快速帘腹、準(zhǔn)確地計數(shù)大量細(xì)胞贰盗,并為研究提供可靠的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。