2021-05-06 pull-down 體外鑒定蛋白互作

來(lái)源:

文獻(xiàn)

主要目的:

?體外 蛋白互作的檢驗(yàn)(如驗(yàn)證酵母雙雜的結(jié)果)庶灿,發(fā)現(xiàn)新的互作蛋白

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:

表達(dá)純化GST、polyHis或Biotin標(biāo)記的誘餌蛋白-----誘餌蛋白與目標(biāo)蛋白相互作用并結(jié)合在一起-----清洗除去非特異性結(jié)合的雜蛋白-----獲得與誘餌蛋白相互作用的目標(biāo)蛋白-----質(zhì)譜分析對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行鑒定吃衅。

優(yōu)勢(shì):

可檢驗(yàn)兩個(gè)蛋白的直接互作-------COIP可能是通過(guò)第三個(gè)蛋白的互作

缺點(diǎn):

不是細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)環(huán)境

問(wèn)題:

1 大腸桿菌表達(dá)蛋白可能形成包涵體

2 有商品化的試劑盒

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