來(lái)源:
文獻(xiàn)
主要目的:
?體外 蛋白互作的檢驗(yàn)(如驗(yàn)證酵母雙雜的結(jié)果)庶灿,發(fā)現(xiàn)新的互作蛋白
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:
表達(dá)純化GST、polyHis或Biotin標(biāo)記的誘餌蛋白-----誘餌蛋白與目標(biāo)蛋白相互作用并結(jié)合在一起-----清洗除去非特異性結(jié)合的雜蛋白-----獲得與誘餌蛋白相互作用的目標(biāo)蛋白-----質(zhì)譜分析對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行鑒定吃衅。
優(yōu)勢(shì):
可檢驗(yàn)兩個(gè)蛋白的直接互作-------COIP可能是通過(guò)第三個(gè)蛋白的互作
缺點(diǎn):
不是細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)環(huán)境
問(wèn)題:
1 大腸桿菌表達(dá)蛋白可能形成包涵體
2 有商品化的試劑盒