一、體視熒光顯微鏡使用方法:
將材料片放在載物臺上剿骨。
開啟熒光顯微鏡穩(wěn)壓器挤庇,然后按下啟動組點燃紫外燈15min內(nèi)不得關(guān)閉,關(guān)閉后3min內(nèi)不得再啟動昆咽。
將激發(fā)濾光片轉(zhuǎn)至v,分色片調(diào)到v,選用495或475nm阻擋濾光片浮声。
選用uvFL40黄绩、uvFL100熒光接物鏡鏡檢。
在玻片上加無熒光油,先用40x初澎,再用100x調(diào)焦鏡檢桑谍,呈現(xiàn)熒光贞间。
因熒光物質(zhì)受紫外光照射時隨時間的增長熒光逐漸變?nèi)跽裕虼绥R檢時應(yīng)經(jīng)常變換視野础浮。
亦可用uvFL10或uvFL20低倍鏡鏡檢材料(用低倍鏡時不加無熒光油)。
二芹务、記錄熒光圖像:
熒光顯微鏡所看到的熒光圖像,一是具有形態(tài)學(xué)特征,二是具有熒光的顏色和亮度,在判斷結(jié)果時,必須將二者結(jié)合起來綜合判斷驱还。結(jié)果記錄根據(jù)主觀指標,即憑工作者目力觀察。作為一般定性觀察颖侄,基本上可靠的展蒂。隨著技術(shù)科學(xué)的發(fā)展箕般,在不同程度上采用客觀指標記錄判斷結(jié)果,如用細胞分光光度計、圖像分析儀等儀器痢虹。但這些儀器記錄的結(jié)果坯墨,也必須結(jié)合主觀的判斷耍攘。
熒光顯微鏡攝影技術(shù)對于記錄熒光圖像十分必要妨托,由于熒光很易褪色減弱医清,要即時攝影記錄結(jié)果。方法與普通顯微攝影技術(shù)基本相同。只是需要采用高速感光膠片如ASA200以上或24o以上则吟。因紫外光對熒光猝滅作用大晰洒,如FITC的標記物砌滞,在紫外光下照射30s按傅,熒光亮度降低50%况芒。所以,曝光速度太慢,就不能將熒光圖像拍攝下來绎速。一般研究型熒光顯微鏡都有半自動或全自動顯微攝影系統(tǒng)裝置。
By?體視熒光顯微鏡操作教程