產(chǎn)品特點

◎卓越的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽性率高達90%以上，基因敲除效果明顯久窟，A549細(xì)胞Lamin A/C 基因敲除效率在95%以上秩冈；

◎極低的細(xì)胞毒性：轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對實驗結(jié)果的影響斥扛；

◎轉(zhuǎn)染細(xì)胞范圍廣入问，絕大多數(shù)貼壁細(xì)胞株都能獲得比較理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果。

產(chǎn)品介紹

RFect小核酸轉(zhuǎn)染試劑是國際知名科學(xué)家崔坤元博士領(lǐng)導(dǎo)我公司研發(fā)團隊在美國西雅圖實驗室研發(fā)成功的一種新型的小核酸轉(zhuǎn)染試劑稀颁。RFect可用來轉(zhuǎn)染siRNA芬失、antisense RNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA匾灶，轉(zhuǎn)染細(xì)胞包括絕大多數(shù)貼壁生長的細(xì)胞棱烂，如一般細(xì)胞株、腫瘤細(xì)胞株等阶女。目前颊糜，無論國外還是國內(nèi)，轉(zhuǎn)染試劑的主要成分均為脂質(zhì)體或聚乙烯亞胺(Polyethylenimine, PEI)秃踩，這兩種成分都具有很大的細(xì)胞毒性衬鱼，并且轉(zhuǎn)染效果不好。RFect采用新型的動物源性的納米材料憔杨，毒性很低并且擁有非常卓越的轉(zhuǎn)染性能鸟赫。與其它品牌的小核酸轉(zhuǎn)染試劑相比，RFect的細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽性率一般在90%以上消别，Lamin A/C 基因抑制效率在95%以上抛蚤，而其它品牌轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽性率一般不超過70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超過75%妖啥。RFect細(xì)胞毒性很低霉颠，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，而其它品牌試劑的轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率一般在30%以上荆虱。血清對轉(zhuǎn)染效果沒有影響蒿偎，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。有關(guān)RFect 小核酸轉(zhuǎn)染試劑的材料合成和試劑配制我們已申請了國際專利怀读，并通過PCT覆蓋國際上多個國家和地區(qū)诉位。本產(chǎn)品適用于細(xì)胞株轉(zhuǎn)染，原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染菜枷，請選擇RFectPM小核酸轉(zhuǎn)染試劑苍糠。

操作步驟：本說明書適用于24孔培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)染實驗，其他規(guī)格的培養(yǎng)板的用量參照下面表格啤誊，表格給出的是每孔的用量與體積岳瞭。

A. 細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞拥娄，每孔500 μl培養(yǎng)基，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時密度在30-50%瞳筏，盡量不要使用抗生素稚瘾。

B. siRNA-RFect混合物準(zhǔn)備：

1. 6pmol siRNA 用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋。

2. 2μl RFect用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋姚炕。輕輕混勻摊欠，室溫孵育5min。注意：確保在25 min內(nèi)執(zhí)行第三步操作柱宦，不要過于延遲些椒。

3. 孵育5min后，將siRNA 稀釋液與RFect 稀釋液混合（總體積100μl）掸刊。輕輕混勻免糕，室溫孵育20 min。

C. 將混合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)（完全培養(yǎng)基培養(yǎng)）：

1. 將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內(nèi)痒给，培養(yǎng)孔內(nèi)含有0.5ml培養(yǎng)的細(xì)胞说墨。輕輕晃動培養(yǎng)板骏全，混勻苍柏。

2. 37°C培養(yǎng)18-72h，檢測基因抑制效果姜贡。如果需要试吁，細(xì)胞培養(yǎng)4-6h時可以更換培養(yǎng)基，但不是必須楼咳。孵育時間的長短熄捍，取決于細(xì)胞類型、

所干擾基因本身及分析方法母怜∮嗟ⅲ可設(shè)置不同的孵育時間進行實驗以確定最佳孵育時間。

轉(zhuǎn)染實驗優(yōu)化: 為了提高轉(zhuǎn)染效率苹熏，建議對轉(zhuǎn)染條件進行優(yōu)化碟贾，特別是首次使用。例如：24孔培養(yǎng)板轨域，調(diào)整?siRNA與RFect試劑的用量袱耽。siRNA 用量在0.6-30 pmol(final concentration 1- 50 nM)之間調(diào)整，RFect試劑用量在1.0 - 3.0μl之間調(diào)整干发≈炀蓿客戶可按照習(xí)慣用量進行預(yù)實驗，如實驗結(jié)果不理想枉长，可適當(dāng)調(diào)整并摸索轉(zhuǎn)染試劑用量冀续。

轉(zhuǎn)染實驗要點：

l 轉(zhuǎn)染過程盡量不要使用抗生素琼讽，否則會導(dǎo)致細(xì)胞死亡增加；

l 首次實驗siRNA的用量設(shè)置在終濃度10nM洪唐、30nM跨琳、50nM、100 nM進行摸索 桐罕，后續(xù)實驗根據(jù)實驗結(jié)果修改脉让。