一底燎、圖像預(yù)處理:
選擇Image > Type冶忱,轉(zhuǎn)化為8-bit;
此時圖片偏暗卜朗,對圖像做適度的調(diào)整熬的,Adjust > Brightness/Contrast
二莉恼、測定脂肪滴大小
思路:
1. 標(biāo)尺校正:
選擇劃線工具拌喉,在圖片上畫出與標(biāo)尺長度相同的線段(按住shift拉出直線),
然后選擇 Analyze > Set scale俐银;
Distance in pixels:線段在圖中的測定值
know distance:已知的長度
unit of length:單位設(shè)置
Global:如果選擇則可以在多張圖片之間保持一致尿背;
添加標(biāo)尺:
自動添加:Analysis > Tools > Scale Bar
width in bar:設(shè)置標(biāo)尺的長度
可以填寫字的大小、寬度捶惜、顏色田藐、位置等,
手動添加:選擇直線工具吱七,劃線坞淮,Analysis > Tool > Scale Bar
2. 圖像閾值:
依次選擇Image > Adjust >Threshold,
在調(diào)出的窗口欄調(diào)節(jié)滑塊陪捷,使得細胞的邊界明晰以便于機器識別回窘,最后點擊Apply;
此時看到市袖,許多脂肪第粘連一在一起啡直,而機器無法識別烁涌,可以
Process > Binary > Watershed
3. 不規(guī)則形態(tài)的測定:
依次選擇Analyze > Tools > ROI Manger
A. 對于獨立的單個脂肪滴,選擇魔棒工具選中后酒觅,單擊Add[t]選中區(qū)域撮执;如下圖:
B. 對于被遮蓋住的脂肪滴,可以選擇圓形工具舷丹,畫出相應(yīng)大小的圓后抒钱,操作如上:
當(dāng)選中所有的圖形后,單擊ROI Manger中的Measure颜凯,彈出計算結(jié)果谋币。
3. 規(guī)則形態(tài)的測定:
如果圖片脂肪滴無重疊,則可以使用軟件內(nèi)置參數(shù)自動計數(shù)症概;
圖像預(yù)處理等操作同上蕾额,然后依次單擊Analyze > Particles
Size(um^2):形狀大小范圍設(shè)定。計算前應(yīng)粗略估計細胞的大小范圍彼城,排除非細胞的形態(tài)诅蝶。具體操作為選擇多邊形工具,畫出最大細胞的輪廓募壕,然后單擊Analyze > Measure调炬,記下彈出菜單顯示細胞的面積值,統(tǒng)計記下最小面積值;
Show: 選擇outlines可以標(biāo)記出形狀輪廓舱馅;
其他可選操作:
拍照轉(zhuǎn)化為灰度后脂肪滴中間出現(xiàn)空洞缰泡,可以將圖片空洞填補:操作如下:
Process > Binary > Make Binary
Process > Binary > Fill holes重疊脂肪滴在計算時候,形成一個整體习柠,造成計算錯誤匀谣。
Process > Binary > Watershed
參考資料:
巧用Image J計算細胞大小
ImageJ圖像加標(biāo)尺scalebar并用標(biāo)尺校正圖片尺寸測量細胞大小
Image J入門教程,細胞面積計算