為什么一定要挑取單克峦帘纭支救？
? ? ? ? 當從甘油保存的細菌或者穿刺菌中復蘇細菌時，從瓊脂板上挑取單菌落再液體培養(yǎng)顯得尤為重要拷淘。
? ? ? ? 為什么呢各墨？由于甘油菌或穿刺菌中的大多數(shù)細菌細胞在遺傳上應該是相同的，但是偶然情況下启涯，會存在個別隱藏的突變細菌贬堵。如果你只是簡單的從混合菌落中挑選了一團細菌，然后在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)结洼，那么突變的細菌就有可能會接管整個培養(yǎng)物黎做，從而影響您的實驗。我們可以通過劃線挑選單個菌落的方式來解決問題松忍。在這種情況下蒸殿，每個單獨的菌落就是單克隆，即它們在遺傳學上是相同的鸣峭。使用這些單克隆菌落形成的液體培養(yǎng)物宏所，將會獲得預期的質粒產率并在后期試驗中獲得更一致的結果。
劃線前需要準備的材料
? ? ? ? 在正式開始培養(yǎng)前摊溶，我們需要收集一些必要的材料爬骤。
首先是含有你感興趣質粒的甘油菌或穿刺菌；
其次是含有合適抗生素的LB瓊脂平板莫换；
無菌的牙簽或者無菌的接種環(huán)霞玄；
酒精燈或其他火焰；
30或37攝氏度的干燥培養(yǎng)箱拉岁；
最后是良好的無菌操作技術溃列。
劃線培養(yǎng)方法
? ? ? ? 首先，我們取出含有適當抗生素的LB瓊脂平板膛薛，確保平板上沒有污染并且干燥听隐。如果平板上有水珠，你可以把它打開然后放在火焰下約10分鐘來風干哄啄。接下來雅任，我們要看一下我們的穿刺菌，確保其中有可見的細菌生長咨跌。然后取一個無菌的牙簽沪么，把它插入并接觸到有細菌生長的穿刺區(qū)域，這個過程也可以是將無菌的牙簽浸入到半融化的甘油菌當中锌半。請注意的是禽车，在牙簽上你不需要看到肉眼可見的一團細菌，看起來很干凈的牙簽表面可能已經被細菌充分覆蓋了。
? ? ? ? 用牙簽輕輕地從平板的邊緣附近開始劃線殉摔，牙簽與平板接觸角度大概在45度左右州胳。請注意一定要輕輕的劃線，不要用牙簽刺破平板逸月，否則你就會在劃線過程中將瓊脂翹起來栓撞。在劃線時要遵循一定的路徑，并且需在每個新路徑開始時用一根新的無菌牙簽碗硬。用第一根牙簽劃線時瓤湘，我們需要輕輕地連續(xù)劃線大約至1/3平板大小，并注意避免碰到平板的邊緣恩尾。扔掉第一根牙簽弛说，并轉動平板，然后使用一根新無菌牙簽從上一次結束的地方開始連續(xù)劃線約 1/3區(qū)域翰意，并在靠近邊緣的地方結束剃浇。最后，我們用第三根牙簽再重復一次這一過程猎物。盡管虎囚，這個過程會很快，我們仍需要很細心蔫磨。
? ? ? ? 需要確保在培養(yǎng)之前平板是完全干燥的淘讥。這是由于，如果細菌在平板上是一層液體的話堤如，它們有可能會在平板上擴散并形成一層菌群而不是單個的菌落蒲列。需要注意的是，要將平板倒置放入培養(yǎng)箱中搀罢，以避免冷凝的液體會滴到菌落上而干擾它們的生長』柔現(xiàn)在我們已經完成了劃線，我們將平板倒置放入培養(yǎng)箱中過夜或者至少培養(yǎng)12小時榔至。你可以看到我們精心劃線后會有單個菌落出現(xiàn)抵赢，之后就可以挑取單個菌落以便用于下游各種各樣的實驗。
