本次精讀的是一篇老文章，2016年發(fā)表在《current biology》上的《Gamete Attachment Requires GEX2 for Successful Fertilization in Arabidopsis》向瓷，通訊作者是新加坡國(guó)立大學(xué)生物科學(xué)系的Frederic Berger教授（我猜是圖片中間那個(gè)）庶骄。研究興趣翻譯如下：保守的蛋白質(zhì)組蛋白不僅僅是DNA的簡(jiǎn)單支架，還參與基因組活動(dòng)的調(diào)節(jié)。 我們探索核心組蛋白的變體如何影響基因組表達(dá)，組織和遺傳。 我們還研究了組蛋白變體與其他染色質(zhì)修飾之間的相互作用澎现，從而貢獻(xiàn)了表觀遺傳，從而調(diào)節(jié)了體細(xì)胞和生殖組織中的細(xì)胞事件每辟。 應(yīng)該是做生殖中表觀的大佬剑辫，不知道為什么做了這篇文章。
科學(xué)問題：植物雙受精過程是否需要主動(dòng)配子識(shí)別和附著機(jī)制（就是想做配子融合）影兽。
背景：對(duì)植物雙受精過程知之甚少揭斧，只有參與融合的HAP2以及精細(xì)胞激活的EC1
怎么辦，正向遺傳學(xué)來幫忙＞摺（正向遺傳學(xué)對(duì)于一個(gè)未知或是知之甚少的領(lǐng)域是一個(gè)很好的辦法讹开，但是缺陷是對(duì)于冗余性較高的基因是個(gè)問題，如果像DMP9倒也還行捐名，要知道擬南芥60%以上的基因都發(fā)生過復(fù)制事件）
怎么做：雙 marker (DM) line, HTR10-RFP (snRFP）精細(xì)胞核 DFWA-GFP(ccGFP)? 中央細(xì)胞 標(biāo)記
0.3%? EMS 處理 8h旦万，5000棵M1種下，篩選育性缺陷的材料镶蹋，發(fā)現(xiàn)一個(gè)材料Y47成艘，受精過程中發(fā)現(xiàn)未受精的精細(xì)胞，并且苯胺藍(lán)染色顯示花粉管接收的過程沒有問題贺归，注意此時(shí)精細(xì)胞應(yīng)該沒有分開淆两。并且通過延時(shí)攝影技術(shù)發(fā)現(xiàn)精細(xì)胞到中央細(xì)胞后長(zhǎng)時(shí)間不動(dòng)，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)確定下來是融合過程起作用拂酣∏锉回交實(shí)驗(yàn)確定是雄方的問題。
有表型就好辦婶熬，就是定位基因吧剑勾，定位到271Kb時(shí)候，發(fā)現(xiàn)一個(gè)強(qiáng)精細(xì)胞定位的基因GEX2赵颅，測(cè)序發(fā)現(xiàn)是個(gè)點(diǎn)突G變成A虽另。Y47命名為gex2-1?，為了確定表型饺谬，作者要來T-DNA插入突變體gex2-2 發(fā)現(xiàn)一個(gè)表型捂刺。此外在做個(gè)回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，好了，基因確定的表型做完了叠萍。
下面就對(duì)這個(gè)基因的特征就行分析被芝发，先看結(jié)構(gòu)：?jiǎn)未慰缒ぃ行盘?hào)肽苛谷，有l(wèi)g-like區(qū)域這一點(diǎn)和哺乳動(dòng)物中izumo類似，這個(gè)胞外域超級(jí)長(zhǎng)格郁。接GFP發(fā)現(xiàn)定位在精細(xì)胞膜上腹殿。
再次仔細(xì)觀察表型，發(fā)現(xiàn)除了沒有發(fā)育的胚珠例书，在突變體自交的植物中還發(fā)現(xiàn)了中止發(fā)育的種子锣尉，于是找回去，發(fā)現(xiàn)是存在單次受精事件决采，又做了回補(bǔ)自沧，確定還是GEX2的問題，這里就比較繞树瞭，表型和回補(bǔ)一會(huì)說不好嗎拇厢？
那么GEX2到底參與精卵融合過程的那一部分呢晒喷？于是他們找到了卵細(xì)胞的Marker：emGFP(pDD45::GFP-PIP2a? and enRFP孝偎，觀察，他們先用消化酶處理細(xì)胞壁凉敲，發(fā)現(xiàn)卵細(xì)胞和中央細(xì)胞變成圓形衣盾，說明細(xì)胞壁處理好了。相比于HAP2能夠粘附在卵細(xì)胞和中央細(xì)胞上爷抓，gex2則有的一個(gè)粘附在卵細(xì)胞上势决，一個(gè)沒有粘附，或者根本沒有粘附。結(jié)合統(tǒng)計(jì)為粘附的比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于已知參與融合過程hap2袱蜡，還有延遲成像過程中祷安，精細(xì)胞一致在粘附和去粘附，認(rèn)為GEX2參與粘附的過程据悔。
作者最后做了一個(gè)演化上的問題：計(jì)算Ka/Ks 選擇壓，用A. thaliana A. lyrata耘沼，發(fā)現(xiàn)相比于HAP2（這個(gè)多保守）极颓，GEX2快速演化，且主要是lg-like的區(qū)域（猜猜也知道）群嗤。
評(píng)論：我覺得后期統(tǒng)計(jì)粘附還不夠精細(xì)菠隆，既然你發(fā)現(xiàn)存在單次受精事件，那到底是誰(shuí)的單次受精不知道，那么統(tǒng)計(jì)粘附是完全可以把單次粘附的數(shù)據(jù)加上骇径，看看到底什么樣子躯肌，而且整體來說n值有點(diǎn)小。并且整體來看GEX2調(diào)控的去粘附比例也就40%左右破衔，可能存在冗余基因清女。但是毫無疑問，作者是極為幸運(yùn)的晰筛，5000棵苗就篩到了基因嫡丙，但是接下來又存在很多問題，還有沒有其他基因參與粘附读第，其在卵細(xì)胞上的識(shí)別蛋白又是什么曙博？這還有待進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)。
