問題1：無擴(kuò)增產(chǎn)物
現(xiàn)象：正對照有條帶，而樣品則無
原因：1席覆、模板:含有抑制物史辙，含量低
對策：純化模板或者使用試劑盒提取模板DNA或加大模板的用量
原因：2、Buffer對樣品不合適
對策：更換Buffer或調(diào)整濃度
原因：3佩伤、引物設(shè)計不當(dāng)或者發(fā)生降解
對策：重新設(shè)計引物（避免鏈間二聚體和鏈內(nèi)二級結(jié)構(gòu)）或者換一管新引物
原因：4聊倔、反應(yīng)條件：退火溫度太高，延伸時間太短
對策：降低退火溫度生巡、延長延伸時間
問題2：非特異性擴(kuò)張
現(xiàn)象：條帶與預(yù)計的大小不一致或者非特異性擴(kuò)增帶
原因：1耙蔑、引物特異性差
對策：重新設(shè)計引物或者使用巢式PCR
原因：2、模板或引物濃度過高
對策：適當(dāng)降低模板或引物濃度
原因：3孤荣、酶量過多
對策：適當(dāng)減少酶量
原因：4甸陌、Mg2+濃度偏高
對策：降低鎂離子濃度
原因：5、退火溫度偏低
對策：適當(dāng)提高退火溫度或使用二階段溫度法
原因：6盐股、循環(huán)次數(shù)過多
對策：減少循環(huán)次數(shù)
問題3：拖尾
現(xiàn)象：產(chǎn)物在凝膠上呈Smear狀態(tài)
原因：1钱豁、模板不純
對策：純化模板
原因：2、Buffer不合適
對策：更換Buffer
原因：3遂庄、退火溫度偏低
對策：適當(dāng)提高退火溫度
原因：4寥院、酶量過多
對策：適量用酶
原因：5、dNTP涛目、Mg 2+濃度偏高
對策：適當(dāng)降低dNTP和鎂離子的濃度
原因：6秸谢、循環(huán)次數(shù)過多
對策：減少循環(huán)次數(shù)
問題4：假陽性
現(xiàn)象：空白對照出現(xiàn)目的擴(kuò)增產(chǎn)物
原因：靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染
對策：1.操作時應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外
? ? ? ? ? ?2.除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外霹肝，所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒估蹄。所用離心管及加樣槍頭等均應(yīng)一次性使用? ? ? ? ??
? ? ? ? ? ? 3.各種試劑最好先進(jìn)行分裝，然后低溫貯存沫换。
原因：引物設(shè)計不合適
對策：選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性臭蚁，因而在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短垮兑，容易出現(xiàn)假陽性冷尉，需重新設(shè)計引物。
