1. 轉(zhuǎn)基因小鼠
- Tg表示轉(zhuǎn)基因（transgene），細(xì)分如下：
- TgH：同源重組倦西，
- TgR：經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體感染的插入耳标，
- TgN： 非同源插入。
轉(zhuǎn)入的基因放在圓括號中胜嗓，不用斜體
轉(zhuǎn)入報告基因或者重組酶系統(tǒng)（例如高职，GFP，lacZ辞州，cre）時初厚，因表達(dá)的組織特異性不同，應(yīng)該在轉(zhuǎn)入基因前表示啟動子孙技，比如Tg(Zp3-cre)
1.1 一般轉(zhuǎn)基因鼠
TdTomato大鼠：（SD-Gt(ROSA26)tm1(CAG-LSL-Tdtomato)/Bcgen）
# SD大鼠-Rosa26位點(diǎn)-【啟動子-LSL-目的基因】-來自百奧賽圖产禾。
ROSA-啟動子-((loxp-membrane TdTomato - polyA- loxp）-（membrane eGFP-polyA))
ROSA-pCA- loxp-mT-pA-loxp - mG-pA
## mTmG小鼠，Cre重組前能夠在膜上發(fā)出紅色熒光牵啦，而被Cre重組后則在膜上發(fā)出綠色熒光
1.2 Cre工具鼠
一般采用原位敲入（KI）技術(shù)亚情，將Cre基因組敲入特定啟動子之后。
根據(jù)位置不同又分為兩類：
①將Cre基因敲入啟動子的第一個起始密碼子之后哈雏；插入起始密碼子之后的Cre蛋白表達(dá)量較高楞件，但可能影響后續(xù)蛋白表達(dá)衫生；
②將Cre基因敲入啟動子后續(xù)蛋白的終止子之前；終止子之前插入的Cre蛋白表達(dá)量相對較低土浸，但不會影響蛋白正常表達(dá)罪针。
- creER： 為cre重組酶與雌激素受體融合而成，可被tamoxifen激活黄伊。如曾經(jīng)的內(nèi)皮Cre：MGI:3848982：Tg(Cdh5-cre/ER<T2>)1Rha【或?qū)懽?Cdh5(PAC)-CreERT2】
Cdh5: Cadherin 5, type 2 or VE-cadherin (vascular endothelial cadherin) also known as CD144 (Cluster of Differentiation 144), is a type of cadherin. It is encoded by the human gene CDH5.- The tamoxifen-inducible cre/ERT2 sequence was inserted into a
PAC(Phage1 artificial chromosome) containing the VE-cadherin gene to generate the transgene construct.Rha: provided by Ralf H Adams.
- CreER<T2>：CreER的改進(jìn)版泪酱，T2上標(biāo)。
通過三個點(diǎn)突變改造ER（estrogen receptor,人類雌激素受體）还最，使之不能結(jié)合雌激素墓阀，只能結(jié)合其類似物（Tamoxifen的代謝產(chǎn)物4-OHT），然后進(jìn)核發(fā)揮Cre重組酶活性拓轻，進(jìn)而增強(qiáng)了對cre酶功能的調(diào)控斯撮。
2. 定點(diǎn)修飾小鼠
- tm（targeted mutation）：利用ES打靶技術(shù)構(gòu)建的小鼠
- em（endonuclease-mediated mutation）：核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)（如CRISPR/Cas9）介導(dǎo)的基因修飾扶叉。
修飾方式上標(biāo)勿锅。
被定點(diǎn)修飾的基因：用基因符號表示，需要斜體
tm：ES細(xì)胞同源重組技術(shù)
原理 利用Cre-Loxp系統(tǒng)對目的基因進(jìn)行可誘導(dǎo)表達(dá)調(diào)控枣氧，當(dāng)兩個Loxp位點(diǎn)位于同一染色體上且方向一致時溢十，Cre重組酶會特異性的將兩個Loxp位點(diǎn)間的序列切除。構(gòu)建Rosa26-(SA /pCAG)-loxp-Stop-loxp（LSL）-cDNA-pA打靶載體作瞄，轉(zhuǎn)入ES細(xì)胞，獲得在Rosa26目的位置發(fā)生正確同源重組的ES克隆危纫，并將其注射到小鼠囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)宗挥，獲得嵌合鼠，通過與野生型小鼠繁殖得到正確同源重組ES細(xì)胞來源的Knockin小鼠种蝶。Knockin小鼠可與各類表達(dá)Cre重組酶的小鼠雜交契耿，獲得組織特異性表達(dá)的小鼠模型。
em： Crispr/Cas9技術(shù)
原理 根據(jù)Rosa26基因序列設(shè)計合成sgRNA螃征，構(gòu)建含同源序列和目的序列的片段搪桂，與Cas9核酸酶mRNA共同注射到小鼠受精卵胞質(zhì)，Cas9 mRNA盯滚、sgRNA與基因組靶序列結(jié)合并切割雙鏈DNA踢械，以含目的片段的同源序列為模版修復(fù)基因組DNA，最終獲得在Rosa26基因intron中定點(diǎn)插入片段的小鼠魄藕。
Rosa26
- ROSA26（Gt(ROSA)26Sor）是6號染色體上的一個安全區(qū)域内列，本身是一個反義長鏈非編碼RNA基因，已被證明在大部分組織和細(xì)胞中都有表達(dá)背率。
- 外源性的基因定點(diǎn)插入這個位點(diǎn)不會影響其他基因的表達(dá)话瞧。20 世紀(jì) 90 年代末 由Philipe Soriano 及其同事發(fā)現(xiàn)(pnas.94.8.3789)嫩与。
Gt: gene trap
β-gal: β-galactosidase，經(jīng)典的報告基因交排。
β-geo：另一個報告質(zhì)粒划滋，融合了gal和neo， Genes & Dev. 1991. 5: 1513-1523 埃篓。
2.1 基因中插入基因
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基因敲入小鼠需要標(biāo)出轉(zhuǎn)入基因处坪，放圓括號中，上標(biāo)都许。
En1基因編碼區(qū)被Otx2基因取代稻薇。圖片發(fā)自賽業(yè)公號
IRES（Internal ribosome entry site,內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)）序列
能招募核糖體對mRNA進(jìn)行翻譯。
將IRES與外源cDNA融合胶征，發(fā)現(xiàn)IRES能獨(dú)立地起始翻譯塞椎。
IRES不僅存在于RNA病毒中，在很多DNA病毒中也頻繁出現(xiàn)睛低，且在哺乳動物案狠、植物以及酵母中均發(fā)現(xiàn)了IRES序列存在，但不同的IRES在功能機(jī)理上有一定差異钱雷。
2.2 基因敲除
類比可知骂铁。
2.3 基因修飾：如flox系統(tǒng)
- Flp/FRT系統(tǒng)，約等于Cre／loxP系統(tǒng)在真核細(xì)胞內(nèi)的同源系統(tǒng)罩抗。
FRT(Flp recognition target)- 這兩個系統(tǒng)比較明顯的區(qū)別是它們發(fā)揮作用的最佳溫度不同拉庵，Cre重組酶發(fā)揮作用的最佳溫度為37℃，而Flp重組酶為30℃套蒂。因此钞支，Cre／loxP系統(tǒng)最適宜在動物體內(nèi)使用。
Appendix：Jax小鼠命名規(guī)則
