非洲豬瘟檢測(cè)流程要點(diǎn)
1望伦、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室按照要求穿好裝備進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室贺辰，病原稀釋及制備，將實(shí)驗(yàn)用假陽(yáng)性按照倍數(shù)稀釋询枚，最高稀釋到一萬(wàn)倍违帆。所有操作流程都在生物安全柜進(jìn)行，按照流程進(jìn)行編號(hào)金蜀，編寫檢測(cè)編號(hào)刷后。在每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都要將白大褂以及手套進(jìn)行更換渊抄。
2、到試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行試劑準(zhǔn)備含衔，按照樣品數(shù)量加陰陽(yáng)對(duì)照進(jìn)行配備二庵，該項(xiàng)目在超凈工作臺(tái)進(jìn)行。將制備好的試劑放入傳遞窗催享，進(jìn)入核酸提取環(huán)節(jié)睡陪。
3、核酸提取區(qū)信殊，進(jìn)行核酸提純，用磁吸法核酸提取試劑盒進(jìn)行提取涡拘，按照步驟加入相應(yīng)提取試劑進(jìn)行提純鳄乏，核酸提取儀程序可以按照檢測(cè)的樣板以及樣品數(shù)量進(jìn)行設(shè)定，工作量不大或者組織器官盡量采用慢提橱野。在添加試劑的時(shí)候應(yīng)該注意8道移液槍的試劑是否全部打進(jìn)提純盒，提純完成后密强，在該實(shí)驗(yàn)室繼續(xù)進(jìn)行我們的試劑進(jìn)入下一步擴(kuò)增環(huán)節(jié)蜗元，通過(guò)傳遞窗送到核酸擴(kuò)增室進(jìn)行下一步工作。核酸提取儀提取完成后進(jìn)行消毒工作薪鹦，紫外線燈消毒30-60分鐘距芬。
4、核酸擴(kuò)增按照試劑盒設(shè)定程序進(jìn)行擴(kuò)增框仔，檢測(cè)完畢后進(jìn)行讀數(shù)离斩，并且進(jìn)行記錄瘪匿。
平板制備及藥敏試驗(yàn)
1、按照要求配備好兩組培養(yǎng)基核偿，營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基及麥康凱培養(yǎng)基顽染，培養(yǎng)基制備按照要求制備，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制備時(shí)在制備培養(yǎng)皿時(shí)放在50℃水浴鍋進(jìn)行保溫防止凝固尼荆，在倒培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)該注意搖勻幅度不能太大防止有氣泡導(dǎo)致培養(yǎng)基也有氣泡孔捅儒，每個(gè)培養(yǎng)皿預(yù)計(jì)20ml左右培養(yǎng)液大概厚度在4mm，完成后生物安全柜室溫放置讓其凝固巧还。
2麸祷、平板劃線注意事項(xiàng)：從無(wú)色的的培養(yǎng)基中取適量的按照培養(yǎng)皿進(jìn)行分區(qū)，第一區(qū)劃線按照面積的1/4的面積進(jìn)行劃線。第二區(qū)連續(xù)劃線與第一區(qū)最后一條線交接荸恕，連續(xù)交接不超過(guò)4次死相，按照同樣方法依次劃3區(qū)，放置37℃恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)8到12小時(shí)算撮。
一切作業(yè)在生物安全柜進(jìn)行肮柜，劃線時(shí)快速準(zhǔn)確，打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋時(shí)間盡量短审洞。
接種時(shí)應(yīng)該手握筆姿勢(shì)芒澜，120°傾斜角，輕輕劃線南吮。
之字形劃線誊酌，相鄰兩線不要有重復(fù)
接種環(huán)在取菌前要進(jìn)行高溫殺菌，第一次劃線跟第二次劃線都要進(jìn)行灼燒碧浊，完成接種后也要進(jìn)行灼燒滅菌辉词。
藥敏試驗(yàn)
操作流程：抗生素選擇--培養(yǎng)基選擇——菌懸液制備——平板涂布——貼藥敏片與培養(yǎng)——結(jié)果觀察及判定
注意事項(xiàng)：
菌懸液，采用純化后單菌落或菌臺(tái)敷搪，用接種環(huán)挑取菌落進(jìn)行瓶壁研磨充分，使得與生理鹽水充分混合嫂便，在與比濁管進(jìn)行比對(duì)闸与，0.5-1之間比較適合践樱。
平板涂布：
用無(wú)菌試子蘸取菌液，在瓶壁旋轉(zhuǎn)擠壓袱院，去除多余菌液均勻涂抹在培養(yǎng)基表面瞭稼，完成后將瓊脂平板邊緣涂抹一圈。
貼藥敏片與培養(yǎng)
平板按照藥敏片進(jìn)行分區(qū)欲虚，每個(gè)區(qū)域中間放置一個(gè)不同的藥敏片峻厚，貼好標(biāo)記培養(yǎng)皿迄汛，37度培養(yǎng)20-24小時(shí)。
