一．核酸抽提原理：
核酸抽提包含樣品的裂解和純化兩大步驟番川。其是：裂解樣品中的核酸游離在體系闹炉；純化游離的核酸诡必，使之與體系中的其它成分分離（如蛋白質(zhì)奢方、鹽及其它雜質(zhì)徹底分離）搔扁。
常用的裂解液：包括去污劑 (如 SDS、Triton X-100蟋字、NP-40稿蹲、Tween 20 等) 和鹽 (如 Tris、EDTA鹊奖、NaCl 等)苛聘。
去污劑的作用，是通過(guò)使蛋白質(zhì)變性忠聚、破壞膜結(jié)構(gòu)设哗、解開(kāi)與核酸相連接的蛋白質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)核酸游離在裂解體系中两蟀。
鹽的作用网梢，除了提供一個(gè)合適的裂解環(huán)境 (如 Tris)，還包括抑制樣品中的核酸酶在裂解過(guò)程中對(duì)核酸的破壞 (如 EDTA)赂毯、維持核酸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定 (如NaCl) 等战虏。
裂解體系中還可能加入蛋白酶，利用蛋白酶將蛋白質(zhì)消化成小的片段党涕，促進(jìn)核酸與蛋白質(zhì)的分開(kāi)烦感，同時(shí)，也便于后面的純化操作以及獲得更純的核酸遣鼓。也有直接使用高濃度的蛋白質(zhì)變性劑 (如 GIT啸盏、GuHCl 等) 裂解的重贺，該方法已經(jīng)成為了 RNA 抽提的主流骑祟，卻不是基因組 DNA 抽提的主流。
二．最常用的純化方法
（一） PC 抽提（Phenol-chloroform extraction：酚氯仿抽提）+醇沉淀：利用PC對(duì)裂解體系進(jìn)行反復(fù)抽提以去除蛋白質(zhì)气笙，實(shí)現(xiàn)核酸與蛋白質(zhì)的分離次企，再用醇將核酸沉淀下來(lái)，實(shí)現(xiàn)核酸與鹽的分離潜圃。
（二）介質(zhì)純化：利用某些固項(xiàng)介質(zhì)缸棵，在某些特定的條件下，選擇性地吸附核酸谭期，而不吸附蛋白質(zhì)及鹽的特點(diǎn)堵第，實(shí)現(xiàn)核酸與蛋白質(zhì)及鹽的分離。
（三）高鹽沉淀去除蛋白質(zhì)是第一種純化方法的一個(gè)變體隧出，省略了PC操作的麻煩踏志，也有不純化的抽提方法，但是用途多局限于簡(jiǎn)單的 PCR胀瞪。
三．裂解方法的評(píng)價(jià)
（一）含蛋白酶的裂解方法是抽提基因組 DNA 的首選针余。包括裂解游離的膜蛋白與基因組 DNA 相連接的游離蛋白質(zhì)。
（二）不使用蛋白酶的去污劑裂解方法，在細(xì)胞基因組 DNA 抽提方面仍然有優(yōu)勢(shì)圆雁。尤其是當(dāng)?shù)寐屎图兌纫蟛皇亲罡呷碳叮?jīng)濟(jì)性及操作簡(jiǎn)單很重要時(shí)，控制好裂解液/樣品的比例是該方法成功的關(guān)鍵伪朽。該方法結(jié)合高鹽沉淀轴咱，可以實(shí)現(xiàn)最簡(jiǎn)單的操作，但純度及得率的穩(wěn)定性可能會(huì)比用 PC 抽提的差一些烈涮。
（三）高濃度蛋白質(zhì)變性劑 (如 GIT嗦玖、GuHCl 等) 的裂解方法是抽提 RNA 的首選。
（四）含 CTAB 的裂解液跃脊，幾乎成為富含多糖的樣品宇挫，如細(xì)菌、植物的基因組 DNA 抽提的首選裂解方法酪术。
（五）SDS 堿裂解法是質(zhì)粒抽提的首選裂解方法器瘪，具有快速、得率高绘雁、幾乎無(wú)基因組 DNA 污染的特點(diǎn)橡疼。
（六）PCR 模板的簡(jiǎn)易裂解方法，也是使用面很廣的一類(lèi)方法庐舟。該方法的特點(diǎn)是無(wú)須純化欣除，樣品被裂解后即可直接取裂解液用于 PCR，非撑猜裕快速历帚。
四．純化方法的評(píng)價(jià)
（一）PC 抽提/醇沉淀方法：穩(wěn)定、可靠杠娱、經(jīng)濟(jì)薪前、方便点把。PC 抽提可以徹底去除蛋白質(zhì)，醇沉淀可以去除鹽，對(duì)于一般的干凈的樣品 (雜質(zhì)為蛋白質(zhì))倚聚，該方法完全可以獲得高質(zhì)量的核酸垢揩。
（二）高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法：同樣也是一個(gè)非常不錯(cuò)的方法骗炉。與 PC 抽提方法相比卵佛，除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點(diǎn)外，該方法幾乎克服了 PC 抽提的所有缺點(diǎn)茧痕。更快野来、更輕松去除蛋白質(zhì)所伴隨的好處是，可以用于大規(guī)模抽提凿渊，不足是純度 (蛋白質(zhì)殘留) 不夠穩(wěn)定梁只。
（三）介質(zhì)純化方法：是一個(gè)越來(lái)越受到重視的方法缚柳。其最大特點(diǎn)是非常適合大規(guī)模核酸抽提，并且因?yàn)槭苋藶椴僮饕蛩赜绊懶√侣啵兌鹊姆€(wěn)定性很高 (雖然純度不一定比PC 純化方法更高)秋忙。其致命弱點(diǎn)是樣品過(guò)量。介質(zhì)可以分為兩大類(lèi)构舟，一類(lèi)是柱式的灰追，即介質(zhì)被預(yù)先裝填在下面是通的柱子里；另外一類(lèi)則是顆粒狀 (如Glassmilk狗超、磁性小珠等)弹澎。
五．醇的沉淀
醇的沉淀，目的是使核酸從裂解體系中沉淀下來(lái)努咐，從而實(shí)現(xiàn)核酸與其它雜質(zhì)（主要是鹽）的分離苦蒿。實(shí)際操作中，許多雜質(zhì)也會(huì)與核酸一起被醇沉淀下來(lái)渗稍，尤其是當(dāng)其它雜質(zhì)的濃度也比較高的時(shí)候佩迟。醇的沉淀并不是非常特異性的，任何有機(jī)大分子及一些鹽竿屹，當(dāng)濃度達(dá)到一定水平后报强，都可能同步被沉淀下來(lái)。最有參考價(jià)值的是 TRIzol 提供的一個(gè)沉淀方案：一半異丙醇加一半高鹽溶液替代純粹的異丙醇拱燃，可以大大降低多糖殘留秉溉。
PEG、LiCl碗誉、CTAB 都可以用于核酸沉淀召嘶。雖然它們遠(yuǎn)沒(méi)有醇沉淀的高使用頻率，但卻各有特點(diǎn)诗充。LiCl 可以沉淀 RNA 以去除DNA苍蔬，CTAB 可以從含多糖的裂解體系中將核酸沉淀下來(lái)诱建。PEG是沉淀病毒顆粒的方便手段蝴蜓。
六．洗滌
洗滌首先一定要將沉淀懸浮起來(lái)；第二就是要有一定的時(shí)間俺猿，尤其是當(dāng)核酸沉淀比較大時(shí) (使核酸沉淀最終蓬松)茎匠；第三是少量多次；第四則是去上清要徹底押袍。
七．核酸質(zhì)量的檢測(cè)問(wèn)題
目前用于正式實(shí)驗(yàn)前檢測(cè)核酸質(zhì)量的方法诵冒，一是電泳，二是紫外分光光度儀谊惭。
（一）電泳檢測(cè)的主要是核酸的完整性和大小汽馋，只要核酸不是太小或者太大 (超出電泳分離范圍)侮东，電泳還可以用于估計(jì)核酸的濃度，但其準(zhǔn)確度與經(jīng)驗(yàn)有關(guān)豹芯；另外悄雅，電泳也可能提供某些雜質(zhì)污染的信息。
（二）紫外分光光度儀檢測(cè)的是純度和核酸含量铁蹈，該儀器的靈敏度非常高宽闲，A230 : A260 : A280 = 1 : 2 (DNA 為 1.8) : 1 為理論上的數(shù)據(jù)，實(shí)際測(cè)定時(shí)會(huì)有一些差別握牧；但如果差別太大容诬，就有問(wèn)題了。如： A260/A230 > 2 就是純的沿腰，如果 A260/A280
> 2.3 就是核酸降解览徒，A260/A230比2大許多，一定是有雜質(zhì)殘留的颂龙。
八．核酸的溶解和保存
純化后的核酸吱殉，最后多使用水或者低濃度緩沖液溶解；其中 RNA以水為主厘托，DNA 則多以弱堿性的 Tris 或者 TE 溶解友雳。經(jīng)典的 DNA 溶解方法多提倡使用 TE 溶解，認(rèn)為 EDTA 可以減少DNA 被可能殘留下來(lái)的 DNase 降解的風(fēng)險(xiǎn)铅匹；如果操作過(guò)程控制得當(dāng)押赊，DNase 的殘留幾乎是可以忽略的，完全可以直接使用 Tris 或者水 (pH 接近 7) 溶解DNA包斑。
實(shí)驗(yàn)室常用保存方法: -20℃保存的 DNA流礁， -70℃保存的RNA。
