-前言:
基因編輯就要用到sgRNA,純化sgRNA最常用的就是ThermoFisher 公司的MEGAclear? Kit异赫,這個(gè)試劑盒不僅價(jià)格昂貴挡闰,訂貨周期較長(zhǎng),本人經(jīng)過(guò)試驗(yàn)古戴,篩選到市面某產(chǎn)品可替代欠橘,并優(yōu)化了操作步驟(不同于說(shuō)明書),如下:
平均:91.7元/次允瞧;
完美替代品:
http://www.aidlab.cn/products-show.asp?anclassid=96&nclassid=62&id=1797
Aidlab為小作坊公司简软,部分產(chǎn)品還是可行,但職業(yè)道德不行述暂,無(wú)底線黑競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手痹升,廣告語(yǔ)令人作吐(世界第一等)。小公司有時(shí)候沒(méi)有售后保障畦韭,反正錯(cuò)都是客戶的疼蛾。
平均:7元/次
優(yōu)化后步驟:
將20ul T7轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管,加入150ul Elution buffer或DEPC Water混勻艺配;
在上述液中加入250ul OD buffer察郁,移液器吹打混勻(不可離心);
組裝過(guò)濾柱转唉,并用100ul平衡液(3M NaOH)平衡過(guò)濾柱皮钠,提高結(jié)合性能;
將RNA混合液加入過(guò)濾柱赠法,室溫麦轰,10000g離心1分鐘;
加入700ul wash buffer 洗滌砖织,室溫12000g離心1分鐘款侵;重復(fù)一次;
空管離心2分鐘去除殘余的乙醇侧纯;
超凈工作臺(tái)吹干5分鐘新锈,然后加入40-60ul Elution buffer或DEPC Water溶解;
產(chǎn)物取出1ul稀釋10倍測(cè)濃度眶熬,剩余進(jìn)行電泳檢測(cè)RNA質(zhì)量完整性及酶切活性妹笆。