定義:一類有通透性的杯狀裝置饲鄙,可認(rèn)為是一種膜濾器(Membrane filters)沫屡,或者是一種通透性的支架(permeable supports)退渗。
組成:杯子底層是一張有通透性的膜纽窟,杯子其余部分的材料與普通的孔板是一樣鸣剪。這層膜帶有微孔寓辱,孔徑大小有0.1-12.0μm压状,根據(jù)不同需要可用不同材料魂贬,一般常用的是聚碳酸酯膜(polycarbonate membrane)。
原理:將Transwell小室放入培養(yǎng)板中籽前,小室內(nèi)稱為上室亭珍,培養(yǎng)板內(nèi)成為下室,上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液枝哄,下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液肄梨,上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。細(xì)胞種在上室內(nèi)膘格,由于聚碳酸酯膜有通透性峭范,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞,從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細(xì)胞生長瘪贱、運動等的影響纱控。
常用實驗:
(1)共培養(yǎng)體系
小于3.0um孔徑條件下,細(xì)胞不會遷徙通過菜秦,因此甜害,若研究不涉及細(xì)胞運動能力,不需要細(xì)胞穿過聚碳酸酯膜球昨,則應(yīng)選擇3.0μm以下孔徑尔店。常用0.4、3.0μm。我們實驗室用的是0.4μm嚣州。將細(xì)胞A種于上室鲫售,細(xì)胞B種于下室,可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細(xì)胞A的影響该肴。
(2)趨化性實驗
可用5.0情竹、8.0、12.0μm膜匀哄,上室細(xì)胞可穿過聚碳酸酯膜進入下室秦效,計數(shù)進入下室的細(xì)胞量可反映下室成分對上室細(xì)胞的趨化能力。
①細(xì)胞B(下室)對細(xì)胞A(上室)的趨化作用:將細(xì)胞A種于上室涎嚼,細(xì)胞B種于下室阱州,可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細(xì)胞A的趨化作用。
②趨化因子對細(xì)胞的趨化作用:將細(xì)胞種于上室法梯,下室加入某種趨化因子苔货,可研究該趨化因子對細(xì)胞的趨化作用。
(3)腫瘤細(xì)胞遷移實驗
常用8.0鹊汛、12.0μm膜蒲赂,原理與腫瘤細(xì)胞遷移實驗類似阱冶。
上室種腫瘤細(xì)胞刁憋,下室加入FBS或某些特定的趨化因子,腫瘤細(xì)胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑木蹬,但與腫瘤細(xì)胞遷移實驗不同的是至耻,聚碳酸酯膜上室側(cè)鋪上一層基質(zhì)膠,用以模仿體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)镊叁,細(xì)胞欲進入下室尘颓,先要分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)將基質(zhì)膠降解,方可通過聚碳酸酯膜晦譬。計數(shù)進入下室的細(xì)胞量可反映腫瘤細(xì)胞的侵襲能力疤苹。