DNA聚合酶（DNA介導的DNA聚合酶）

T4 DNA聚合酶

• 概述：在模板及引物存在的條件下鲸阔，T4 DNA聚合酶催化沿5′→3′方向合成DNA劣砍。此酶還具有3′→5′外切核酸酶的活性磺箕，該活性比DNA聚合酶I強欠动。與DNA聚合酶I不同镐躲，T4DNA聚合酶不具有5′→3′核酸外切酶活性骆捧。
• 應用：缺口填充（無鏈置換活性）权均；切除3′突出末端或補平5′突出端缸夹，形成平末端；通過置換合成法標記探針螺句；單鏈刪除后亞克隆
• 反應條件：11℃孵育20分鐘虽惭，或室溫(20-25℃)孵育5分鐘；75℃孵育20分鐘失活蛇尚。
• 注意事項：由于該酶具有3′→5′核酸外切酶的活性芽唇，提高反應溫度、增加酶量取劫、沒有加入dNTP或反應時間過長都可能造成DNA末端堿基被切除形成凹陷匆笤。

DNA聚合酶I（E.coli）

• 概述：DNA聚合酶I（E.coli）是依賴于DNA的DNA聚合酶，具有3′→5′和5′→3′核酸外切酶活性谱邪。該酶的5′→3′核酸外切酶活性能夠切除位于延伸鏈前端的核苷酸炮捧，從而使切刻平移成為可能
• 應用：DNA切刻平移；cDNA第二條鏈的合成
• 反應條件：75℃孵育20分鐘失活惦银。
• 注意事項：切刻平移反應時需額外添加DNaseI

DNA聚合酶I（Klenow）大片段

• 概述：DNA聚合酶I咆课，大片段（Klenow片段）是E.coliDNA聚合酶I的蛋白水解產(chǎn)物，具有DNA聚合酶活性和3′→5′核酸外切酶活性扯俱，但缺失了5′→3′核酸外切酶活性书蚪。Klenow既保留了全酶的高保真性，又不會降解DNA5′末端
• 應用：用隨機引物制備探針迅栅；切除3′突出端或補平5′突出端殊校，形成平末端；cDNA第二條鏈的合成读存；
• 反應條件：75℃孵育20分鐘失活
• 注意事項：由于該酶具有3′→5′核酸外切酶活性为流，升高反應溫度、加入過量的酶让簿、未加入dNTP或反應時間過長均會導致DNA末端堿基被切除形成凹陷

Klenow片段（3'→5'exo-）

• 概述：Klenow片段（3′→5′exo-）是DNA聚合酶I的N末端截短物敬察，它保留了DNA聚合酶活性，但失去了5′→3′核酸外切酶活性拜英。該酶經(jīng)突變（D355A静汤，E357A）去除了其3′→5′的核酸外切酶活性（1）
• 應用：用隨機引物制備探針；隨機引物法標記；cDNA第二條鏈的合成
• 反應條件：75℃虫给，20分鐘
• 注意事項：Klenow片段（3′→5′exo-）因去除了3′→5′核酸外切酶的活性藤抡，故不適用于生成平末端的反應。

T7 DNA聚合酶

• 概述：天然T7 DNA聚合酶由兩個亞基組成：T7基因5蛋白（聚合酶活性及3′→5′外切酶活性）和E.coli硫氧還蛋白（輔助蛋白抹估，增強T7基因5蛋白對模板的親和能力）缠黍，使得DNA的合成可延伸至上千個核苷酸，相比于大腸桿菌DNA聚合酶I药蜻，Klenow片段及T4DNA聚合酶瓷式，它的延續(xù)合成能力高得多。經(jīng)修飾后的T7DNA聚合酶语泽，去除3′→5′外切酶活性贸典，增強了延續(xù)合成及消除二級結(jié)構(gòu)影響的能力，是一種理想的DNA序列測定用酶
• 反應條件：37℃孵育踱卵。75℃孵育10分鐘失活
• 注意事項：該酶具有快速延伸的特性廊驼，T7DNA聚合酶不能用于DNA測序。

末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）

• 概述：末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）是一種不依賴于模板的 DNA 聚合酶惋砂，可以催化在寡核苷酸妒挎、單鏈或雙鏈DNA的3'羥基端加上dNTP。
• 應用：催化DNA的3′末端添加同聚物西饵；利用修飾堿基（如ddNTP酝掩，DIG，dUTP）標記DNA3′末端眷柔；TdT介導的dUTP缺口末端標記技術(shù)（細胞凋亡的原位檢測）期虾；TdT依賴的PCR

Taq DNA聚合酶

• 概述：Taq DNA Polymerase簡稱Taq酶，是最常用的DNA聚合酶之一闯割。是一種來源于嗜熱菌Thermus aquaticus的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶彻消，95℃孵育時的半衰期大于40分鐘。Taq酶可以催化5'至3'方向的依賴于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合宙拉。Taq酶沒有3'至5'的外切酶活性，有非常低的5'至3'外切酶活性丙笋。由于Taq酶沒有3'至5'的外切酶活性谢澈，因此在DNA聚合過程中相當于核苷酸轉(zhuǎn)移酶的作用，最終會導致PCR產(chǎn)物的3'末端會產(chǎn)生3'-dA overhangs御板，即產(chǎn)生帶一個A的3'粘端锥忿。
• 應用：PCR、DNA標記和測序等怠肋。Taq酶最長可以擴增長達8kb的DNA片段敬鬓，通常適合擴增3kb以下的DNA片段。Taq酶擴增產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物帶有3'-dA overhangs，可以用于基于T載體的PCR片段克隆钉答。PCR反應過程中可以摻入生物素础芍、地高辛或一些熒光機團標記的脫氧核苷酸，即可以用核酸的標記反應数尿。Taq酶還可以用于DNA測序仑性。

Taq熱啟動DNA聚合酶

熱啟動Taq DNA聚合酶是一種采用化學修飾或者抗體結(jié)合封閉酶活性中心的重組Taq DNA 聚合酶，該酶在室溫下沒有活性右蹦，避免形成引物二聚體和非特異性延伸诊杆，95℃加熱激活后可恢復酶活性，活化的酶具有與Taq DNA聚合酶相同的功能何陆。

等溫擴增和鏈置換

phi29 DNA聚合酶

• 概述：phi29 DNA 聚合酶是從嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillus subtilis）的噬菌體 phi29 中克隆出的 DNA聚合酶晨汹。此酶具有卓越的鏈置換和連續(xù)合成特性，并具有 3′→5′ 核酸外切酶校讀活性贷盲，可連續(xù)合成長達70kb的DNA片段宰缤。
• 應用：催化雙鏈DNA 5’末端單核苷酸的移除；應用于需要強鏈置換和/或連續(xù)合成的復制反應晃洒；中溫條件下高保真復制
• 反應條件：該酶的最佳反應溫度為30℃慨灭， 65℃孵育10分鐘即可使該酶失活

Bst DNA聚合酶，大片段

• 概述：BstDNA聚合酶球及，大片段是BacillusstearothermophilusDNA聚合酶的一部分氧骤，具有5′→3′DNA聚合酶活性，但缺失5′→3′核酸外切酶活性吃引。
• 應用：DNA等溫擴增筹陵；富含GC區(qū)域的DNA測序；納克級DNA模板的快速測序镊尺；可用于要求嗜溫鏈置換的實驗
• 反應條件：80℃孵育20分鐘失活
• 注意事項：建議反應溫度不要超過70℃朦佩。BstDNA聚合酶，大片段不能用于熱循環(huán)測序或PCR庐氮。

cDNA合成

反轉(zhuǎn)錄酶

反轉(zhuǎn)錄酶都具有多種酶活性语稠，主要包括

• RNA指導的DNA聚合酶活性；以RNA為模板弄砍，催化dNTP聚合成DNA的過程仙畦。此酶需要RNA為引物，反轉(zhuǎn)錄酶中不具有3′→5′外切酶活性音婶，因此沒有校正功能慨畸，所以由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的DNA出錯率比較高。
• RNaseH活性衣式；由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的cDNA-RNA雜交分子寸士，將由RNaseH從RNA5′端水解掉RNA分子檐什。
• DNA指導的DNA聚合酶活性；以反轉(zhuǎn)錄合成的第一條DNA單鏈為模板弱卡，以dNTP為底物乃正，合成第二條DNA分子。

AMV 反轉(zhuǎn)錄酶

• 概述：禽骨髓母細胞瘤病毒（AMV）反轉(zhuǎn)錄酶是一種RNA介導的DNA聚合酶谐宙。該酶能以RNA（合成cDNA時）或單鏈DNA為模板從引物開始合成互補的DNA鏈烫葬。
• 應用：cDNA第一鏈的合成，RNA測序凡蜻。
• 反應條件：由于AMV RT在較高反應溫度下較穩(wěn)定(37-58℃)搭综，特別適用于具有復雜二級結(jié)構(gòu)的模板的逆轉(zhuǎn)錄。
• 注意事項：解凍后貯存于-20℃划栓。反復凍融會導致酶失活兑巾。長時間貯存可分裝后置于-70℃

M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶

• 概述：莫洛尼氏鼠白血病病毒（M-MuLV）反轉(zhuǎn)錄酶是一種RNA介導的DNA聚合酶。該酶能以RNA（合成cDNA時）或單鏈DNA做模板由引物起始合成一條互補的DNA忠荞。M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶無3′→5′核酸外切酶活性蒋歌。
• 應用：第一鏈cDNA合成，用于RT-PCR和實時RT-PCR委煤。合成cDNA堂油，用于克隆和表達研究。制備芯片研究用標記的cDNA探針碧绞。DNA標記府框。引物延伸法分析RNA
• 反應條件：最佳活性溫度為42℃。溫度高達50℃時仍有活性讥邻。70℃孵育10分鐘失活

DNA修飾酶

T4 多聚核苷酸激酶

• 概述：T4多聚核苷酸激酶能夠催化ATP的γ-位磷酸基團轉(zhuǎn)移到寡核苷酸鏈（雙鏈或單鏈DNA或RNA）的5′-羥基末端以及3′-單磷酸核苷上迫靖。T4多聚核苷酸激酶（NEB#M0201）還具有3′磷酸酶活性，將3′-磷酸基團從寡核苷酸的3′磷酸末端兴使、脫氧3′-單磷酸核苷和脫氧3′-二磷酸核苷上水解掉系宜。經(jīng)修飾后的酶（NEB#M0236）具有所有激酶的活性，但是缺失了3′磷酸酶活性
• 應用：DNA或RNA5′末端的磷酸化发魄，以便進行連接反應盹牧；DNA或RNA的末端標記，用作探針和進行DNA測序欠母；用T4多聚核苷酸激酶除去3′磷酸基團欢策；
• 反應條件：37℃孵育；65℃孵育20分鐘失活
• 注意事項：要提高平齊末端或5′凹陷末端的磷酸化效率赏淌，可在加入T4多聚核苷酸激酶前，先將DNA溶液于70℃加熱5分鐘啄清，然后冰上冷卻六水，并加入5%（W/V）的PEG-8000俺孙。T4多聚核苷酸激酶需要ATP才能發(fā)揮活性，但是為了適用于高活力的放射性標記反應掷贾，在隨酶提供的反應緩沖液中不含ATP睛榄。一般來說，進行激酶反應之后是連接反應想帅。在這種情況下场靴，T4多聚核苷酸激酶反應在連接酶反應緩沖液中37℃溫育30分鐘即可。反應后的產(chǎn)物可直接進行連接港准，無需改變緩沖液和進行熱失活旨剥。如果連接時需要保持其它DNA片段的去磷酸化狀態(tài)，則需要在連接反應前熱失活T4多聚核苷酸激酶浅缸。

小牛腸堿性磷酸酶（CIP）

• 概述：小牛腸堿性磷酸酶（CIP）催化DNA和RNA5′和3′磷酸單脂的去磷酸化反應轨帜。另外，CIP水解核糖和脫氧核糖核苷三磷酸（NTP和dNTP）衩椒。CIP在分子生物學研究中應用廣泛蚌父，如去除DNA和RNA末端的磷酸基團，用于后續(xù)的克隆和探針末端標記毛萌。在克隆中苟弛，對線性載體去磷酸化，防止自連阁将。該酶可以作用于5′突出端膏秫、凹陷端和平末端。CIP也可以用來降解PCR反應中的游離dNTP冀痕，用于制備測序模板和SNP分析荔睹。
• 應用：DNA和RNA的去磷酸化；克隆載體去磷酸化言蛇，防止載體自連僻他；測序或SNP分析前除去PCR反應中dNTP和焦磷酸鹽T4 PNK標記5′DNA末端前的去磷酸化
• 反應條件：37℃ 溫育

蝦堿性磷酸酶（rSAP）

• 概述：蝦堿性磷酸酶（rSAP）是熱敏感的重組堿性磷酸酶，rSAP與野生型酶一樣腊尚，不包含任何親和標簽或其他修飾吨拗。rSAP非特異性的催化DNA和RNA5′和3′磷酸單脂的去磷酸化反應。另外婿斥，rSAP水解核糖和脫氧核糖核苷三磷酸（NTP和dNTP）劝篷。rSAP在分子生物學研究中應用廣泛，如去除DNA和RNA末端的磷酸基團民宿，用于后續(xù)的克隆和探針末端標記娇妓。rSAP也可以用來處理PCR反應中的dNTP，用于制備測序模板和SNP分析活鹰。rSAP在65℃溫育5分鐘即可完全哈恰、不可逆失活只估，因此，在連接或末端標記之前着绷，可以不用去除rSAP
• 應用：DNA和RNA的去磷酸化蛔钙；克隆載體去磷酸化，防止載體自連荠医；測序或SNP分析前除去PCR反應中dNTP和焦磷酸鹽T4 PNK標記5′DNA末端前的去磷酸化
• 反應條件：37℃溫育吁脱， 65℃溫育5分鐘失活。

無機焦磷酸酶（大腸桿菌）

• 概述：無機焦磷酸酶（E. coli）催化無機焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽
• 應用：反轉(zhuǎn)錄反應中提高RNA 產(chǎn)量彬向，增強DNA復制

ATP 硫酸化酶

• 概述：ATP硫酸化酶通過轉(zhuǎn)移硫酸根至ATP的腺嘌呤單磷酸基團兼贡，形成腺苷-5′-磷酰硫酸（APS）和焦磷酸（PPi），從而催化硫酸根的活化幢泼。該反應是可逆的：ATP硫酸化酶也可以催化APS和PPi合成ATP紧显。
• 應用：高效將ATP轉(zhuǎn)化為AMP；在DNA測序循環(huán)中去除脫氧核糖核苷酸缕棵；將5′端三磷酸化的RNA轉(zhuǎn)化為可連接的單磷酸化RNA孵班；將5′端三磷酸化的RNA轉(zhuǎn)化為單磷酸RNA
• 反應條件：37℃溫育， 65℃溫育20分鐘失活招驴。

DNA連接酶

T4 DNA 連接酶

• 概述：該酶催化雙鏈DNA或RNA上相鄰的5′-磷酸末端和3′-羥基末端形成磷酸二酯鍵篙程。該酶不僅能夠催化平齊末端或粘性末端之間的連接，還可以修復雙鏈DNA别厘、RNA或DNA/RNA雜交雙鏈中的單鏈切刻虱饿。
• 應用：高效連接粘性末端和平末端；T/A克麓ヅ俊氮发；dsDNA切刻修復；構(gòu)建高豐度克隆文庫冗懦；RNA和DNA的連接
• 反應條件：16℃溫育爽冕，65℃孵育10分鐘滅活
• 注意事項：與E.coliDNA連接酶需要NAD+作輔因子不同，T4DNA連接酶的輔因子是ATP披蕉。

T7 DNA 連接酶

• 概述：T7 DNA連接酶來源于T7噬菌體颈畸，它是一種ATP依賴型雙鏈DNA連接酶，該酶可催化雙鏈DNA相鄰5′磷酸末端和3′羥基基團之間形成磷酸二酯鍵没讲。T7DNA連接酶可以有效地催化粘性末端和切刻的連接眯娱。與T4和T3DNA連接酶不同，T7DNA連接酶不能有效地催化平末端連接爬凑。因此徙缴，在實驗過程中，當平末端和粘性末端同時存在時嘁信，僅需粘性末端發(fā)生連接娜搂，T7DNA連接酶是理想的選擇迁霎。
• 應用：僅用于連接粘性末端吱抚，dsDNA切刻修復
• 反應條件：25℃溫育百宇，65℃孵育10分鐘滅活
• 注意事項：ATP是必需的輔助因子。

T3 DNA 連接酶

• 概述：T3DNA連接酶來源于T3噬菌體秘豹，是ATP依賴型雙鏈DNA連接酶携御，可以有效催化粘性末端、平齊末端和切刻的連接既绕。加入PEG6000可提高平齊末端連接效率啄刹。T3DNA連接酶在反應中對NaCl的耐受性是T4DNA連接酶的2倍，因此凄贩，當體外分子生物學實驗中需要考慮實驗離子濃度下DNA連接酶活性時誓军，就多了一個選擇。
• 應用：連接粘性末端或平末端疲扎，高鹽耐受力昵时，dsDNA切刻修復
• 反應條件：25℃溫育，65℃孵育10分鐘滅活
• 注意事項：ATP是必需的輔助因子椒丧。

E. coli DNA 連接酶

• 概述：催化雙鏈DNA粘性末端的5′-磷酸和3′-羥基形成磷酸二酯鍵壹甥。不能有效連接平末端底物。E.coliDNA連接酶以NAD為輔因子壶熏。在4-37℃范圍內(nèi)句柠，E.coliDNA連接酶均有活性。
• 應用：dsDNA切刻修復棒假，cDNA克隆
• 反應條件：16℃溫育溯职，65℃孵育20分鐘滅活
• 注意事項：該酶以NAD+（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）作為輔因子。該酶對平末端片段的連接效率極低

SplintR? 連接酶

• 概述：SplintR連接酶也稱為PBCV-1DNA連接酶或Chorella病毒DNA連接酶帽哑，它能夠高效催化相鄰的DNA核苷酸的連接谜酒，這個連接過程需要一條互補的RNA在兩條DNA單鏈間起“夾板”或“橋梁”的固定作用。這種以前沒有報道過的活性可能推動一些創(chuàng)新性miRNAs和mRNAs祝拯，包括SNPs的分析方法甚带。在二代測序和分子診斷等眾多領(lǐng)域中，SplintR是富集目的基因的理想選擇佳头。它具有穩(wěn)定的生物活性鹰贵，對RNA介導固定的DNA底物親和性強（米氏常數(shù)Km=1nM），能夠在復雜的混合物中檢測到亞納摩爾級的特定RNA康嘉。因此碉输，在RNA檢測技術(shù)中，SplintR連接酶不失為最佳選擇用酶亭珍。
• 應用：連接被互補RNA固定的相鄰的單鏈DNA敷钾；鑒定miRNAs和mRNAs枝哄，包括SNPs
• 反應條件：最佳反應溫度是16℃，65℃孵育20分鐘滅活

核酸內(nèi)切酶及外切酶

分類方式

• 核酸內(nèi)切酶 endonuclease 核酸內(nèi)切酶是在核酸水解酶中阻荒，水解DNA分子鏈內(nèi)部磷酸二酯鍵生成寡/寡聚核苷酸的酶挠锥。從對底物的特異性來看，可分為DNaseⅠ侨赡、DNaseⅡ等僅分解DNA的酶蓖租；脾臟RNase、RNaseT1等僅分解RNA的酶羊壹；還有就是如鏈孢霉（Neurospora）核酸酶這類既分解DNA又分解RNA的酶蓖宦。一般來說，大都不具堿基特異性油猫，但也有諸如HindⅢ稠茂、EcoRⅠ等具有限制性的，能夠識別并切斷特定的堿基或堿基序列的酶情妖。

• 核酸外切酶是一類能從多核苷酸鏈的一端開始按序催化水解3睬关、5-磷酸二酯鍵，降解核苷酸的酶鲫售。其水解的最終產(chǎn)物是單個的核苷酸（DNA為dNTP共螺，RNA為NTP）。分為水解權(quán)磷酸二酯鍵的3′端生成5′-單核苷酸的酶情竹，及水解5′端生成3′-單核苷酸的酶藐不。前者有蛇毒磷酸二酯酶及大腸桿菌核酸外切酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ等秦效；后者有脾臟磷酸二酯酶雏蛮、嗜酸乳桿菌核酸酶

  
  
  NEB核酸內(nèi)切酶及核酸外切酶特點
  
  
  NEB核酸內(nèi)切酶及外切酶應用

RNA酶

核糖核酸酶H

• 概述：RNaseH是一種核糖核酸內(nèi)切酶，可以特異性地水解DNA-RNA雜合鏈中的RNA阱州。RNaseH不能水解單鏈或雙鏈DNA或RNA中的磷酸二酯鍵挑秉，即不能消化單鏈或雙鏈DNA或RNA。
• 應用：特異性消化DNA-RNA雜合鏈中的RNA苔货，常用于cDNA第二鏈的合成
• 反應條件：37℃孵育犀概。加入0.5MEDTA(pH8.0)終止反應。

核糖核酸酶A

• 概述：核糖核酸酶A是內(nèi)切核糖核酸酶夜惭，可特異地攻擊RNA上嘧啶殘基的3'端姻灶，切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。反應終產(chǎn)物是嘧啶3'磷酸及末端帶嘧啶3'磷酸的寡核苷酸诈茧。無輔因子及二價陽離子存在時产喉，核糖核酸酶A的作用可被胎盤RNA酶抑制劑(B1ackburn et al．1977)或氧釩—核糖核苷復合物(Puskas et al．1982)所抑制。
• 應用：核糖核酸酶A（RNase A）最常見的應用在于質(zhì)粒DNA或基因組DNA制備過程中去除RNA

核糖核酸酶T1

概述：核糖核酸酶T1（RNase T1）來源于米曲霉（Aspergillus orjzae），它特異地作用于鳥嘌呤3’端磷酸曾沈，切割位點在鳥嘌呤的3’磷酸和相鄰核苷酸的5‘羥基之問的磷酸二酯鍵这嚣，反應終產(chǎn)物為3’鳥苷酸和末端帶3’鳥苷酸的寡核苷酸片段。RNaseTl的反應條件極廣塞俱，且極難失活姐帚，其催化活性類似于RNase A。

核糖核酸酶R

概述：RNase R是一種核糖核酸外切酶敛腌，廣泛應用于circRNA的鑒定卧土、富集和相關(guān)實驗，RNase R來源于大腸桿菌RNR超家族像樊，可以從3’-5’方向切割降解RNA，能夠消化幾乎所有的線性RNA分子旅敷，但不易消化呈環(huán)形的RNA生棍、套索結(jié)構(gòu)或3’端突出末端少于7 nt的雙鏈RNA分子（Cheng ZF et al., 2002）。

RNaseR作用機制

RNA 連接酶

已報道的RNA連接酶

RNA連接酶選擇

RNase抑制劑

• 人胎盤RNase抑制劑
  RNase抑制劑是重組人胎盤蛋白質(zhì)媳谁，可以特異性地抑制RNaseA涂滴、B、C活性晴音，但對RNase1柔纵、RNaseT1、S1核酸酶锤躁、RNaseH和來源于曲霉屬的RNase無效搁料。此外，與下列聚合酶共同使用時系羞，未觀察到其抑制聚合酶的活性郭计，如：TaqDNA聚合酶、AMV或M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶和噬菌體RNA聚合酶（SP6椒振、T7或T3）昭伸。
• 小鼠RNase抑制劑
  小鼠RNase抑制劑是鼠源重組蛋白，分子量為50kDa澎迎，可以特異性抑制RNaseA庐杨、B和C活性。它與RNase以1:1的比例高效非共價結(jié)合從而抑制其活性夹供。但對RNase1灵份、RNaseT1、S1核酸酶罩引、RNaseH或來源于曲霉屬的RNase無效各吨。此外，與下列聚合酶共同使用時，該抑制劑不會抑制聚合酶的活性揭蜒，如：TaqDNA聚合酶横浑、AMV或M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶或噬菌體RNA聚合酶（SP6、T7或T3）屉更。
  重組小鼠RNase抑制劑不含有半胱氨酸徙融。已證實，人源中的半胱氨酸對氧化非常敏感并導致抑制劑失活瑰谜。因此欺冀，小鼠RNase抑制劑與人/豬RNase抑制劑相比，抗氧化能力顯著提高萨脑，且在DTT濃度較低（＜1mM）時更穩(wěn)定隐轩。這使其在不適宜高濃度DTT的反應中更具優(yōu)勢，如實時RT-PCR渤早。
• 氧釩核糖核苷復合物
  氧釩核糖核苷復合物是通過Berger改良方法將四種rNTP的等摩爾混合物與氧化釩IV混合而成（1）职车。每一批復合物都要經(jīng)過氧化釩V成分以及RNase活性抑制的檢測。
  氧釩復合物可用在mRNA的純化過程中鹊杖，作為外源RNase的抑制劑悴灵。也可在細胞裂解和蔗糖梯度細胞質(zhì)成分分離過程中，抑制RNase活性。

reference
1.http://www.neb-china.com/index.asp
2.NEB catlog:https://international.neb.com/support/catalog-and-literature-request