大佬說，我只說一次，你自己要記住
以最火熱的p53為例
Step 1 先找p53基因序列
1. NCBI--輸入p53并選擇物種human：tumor protein p53 [Homo sapiens (human)]
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene
2. Ctrl+F未檩，輸入sequence，快速定位（當然其實拉下去就是了）粟焊，點擊Genebank
3. 下載p53基因序列
4. 用SnapGene軟件打開序列冤狡，并簡單了解每個元件
最好是可以學一下SnapGene這個軟件的使用方法（有視頻）孙蒙，個人認為，自行查資料理解每一個元件的含義和作用悲雳，可以幫助更快的補充背景知識挎峦。通過將散落的知識點集合起來，最后拼湊成自己的知識地圖合瓢。
那么坦胶，為什么看起來好像這些mRNA都一樣，怎么不只放一條完事了晴楔？不是滴顿苇。。税弃。還有不一樣的mRNA纪岁。
在學生信的時候，聽到過一個詞则果，“可變剪接”幔翰，有了初步印象之后，在這里才算是實實在在看到了西壮，我認真的數(shù)了數(shù)遗增，mRNA畫了15條，TP53蛋白也畫了15條款青。那么我們可以理解為贡定，TP53有15個亞型，當然可都，每個亞型都有自己的mRNA缓待。
Step 2 分析敲除位點（找到合適的敲除位置）
怎么樣才能通過盡量少的sgNRA數(shù)量，去敲除盡量多的TP53蛋白渠牲。既然是做knockout旋炒，那一定是要所有的亞型都不能表達。那么既然如此签杈，就是要敲除掉這些亞型共有的區(qū)域瘫镇，而且越前面越好（如果只敲除尾巴，TP53合成了半個身子答姥，半個身子的TP53說不定也能起作用）铣除，另外，也不能敲除掉內(nèi)含子（說是鹦付，如果敲掉了尚粘，可能會形成進的剪接，就有新的蛋白出現(xiàn)）----知識點好伐~
1. 發(fā)現(xiàn)所有亞型共有區(qū)域
2. 查看詳細信息敲长，得知第一個segment（片段）是從12417-12498郎嫁，一共82 bp
3. 在Sequence中查看秉继，復制一整個segment的堿基序列如下
segment堿基序列atggccatctacaagcagtcacagcacatgacggaggttgtgaggcgctgcccccaccatgagcgctgctcagatagcgatg
Step 3 設計sgRNA
首先，先附上鼎鼎大名的張峰實驗室提供的網(wǎng)頁 https://zlab.bio/guide-design-resources
1. 打開網(wǎng)頁泽铛，選擇網(wǎng)頁工具--博德研究所
2. 粘貼序列尚辑，一步到位
3. 查看結果
我沒有寫結果怎么查看，或者分析結果耶盔腔，因為杠茬。。弛随。因為做到這里澈蝙，真正想學的人，感興趣的人早就去看了撵幽。
4. 選擇目的序列
略略略灯荧，哈哈哈哈哈~~
感謝師兄DZ
