本期解讀文獻內(nèi)容“MicroRNA-137的表觀遺傳沉默增加ASCT2的表達和腫瘤谷氨酰胺的代謝.
一、調(diào)控通路
當DNMT（甲基轉(zhuǎn)移酶）抑制劑消耗完時，DNMT結合到靶標基因miR-137的啟動子上對啟動子DNA進行甲基化修飾從而抑制miR-137表達酥泞；當DNMT抑制劑存在時吵血，DNMT不能結合到靶標基因miR-137的啟動子上從而使miR-137順利表達尖殃，而miR-137會結合到ASCT2 Mrna的3’-UTR抑制其翻譯為蛋白質(zhì)以故；ASCT2是谷氨酰胺代謝過程的關鍵酶，ASCT2的表達促進谷氨酰胺的代謝护锤。
二官地、實驗流程
本文中作者分為兩個部分進行闡述：miR-137作用于ASCT2 mRNA的3’-UTR抑制ASCT的表達，從而使谷氨酸代謝減弱烙懦；甲基化酶結合到miR-137啟動子上促進DNA甲基化抑制miR-137的表達驱入。
（1）作者首先通過三種方法預測以ASCT2為靶標的microRNA，建立miR-137和miR-122過表達細胞株檢測ASCT的表達表明miR-137和miR-122過表達使ASCT2表達降低氯析，然后用WB檢測其他microRNA過表達后的ASCT2的表達表明處理miR-137和miR-122外其他microRNA均不影響ASCT表達亏较，于是作者又通過對不同細胞系進行miR-137過表達后檢測ASCT2的表達進一步驗證miR-137對ASCT2表達的抑制；為了驗證miR-137對ASCT2的抑制機制掩缓，作者通過3’-UTR熒光素酶實驗驗證miR-137與ASCT2 3’-UTR結合從而抑制蛋白表達雪情；作者通過對ASCT2敲低、miR-137敲低和抑制后細胞谷氨酰胺代謝的檢測驗證miR-7通過抑制ASCT表達來抑制谷氨酰胺的代謝你辣。
（2）作者用ChIP實驗技術驗證了甲基轉(zhuǎn)移酶MECP2旺罢、DNMT1和DNMT3B與miR-137啟動子上的CpG島結合使其甲基化抑制miR-137的表達，然后檢測MeCP2敲低或5-Aza-CdR處理后的細胞的miR-137的表達和谷氨酰胺的代謝绢记。
三、核心FIGURE
Figure1說明的是miR-137作用于ASCT2 Mrna的3’-UTR抑制ASCT2的表達正卧，降低谷氨酸代謝蠢熄。
a、 不同方法預測以ASCT2作為靶標的microRNA炉旷。
b签孔、 對miR-137叉讥、miR-122過表達后細胞檢測ASCT2的表達，表明miR-137和miR-122過表達使ASCT2的表達降低饥追。
c图仓、 對一系列的microRNA過表達，然后用WB檢測ASCT2的表達但绕，表明只有MiR-137和miR-122過表達后使ASCT2表達下降救崔。
d、 MiR-137與ASCT2 Mrna 3’-UTR結合位點預測捏顺。
e-f六孵、分別用Q-PCR和WB檢測不同細胞系miR-137過表達后ASCT2的表達，表明miR-137過表達使細胞的ASCT2表達降低
g幅骄、熒光素酶實驗劫窒，檢測miR-137與ASCT2 3’-URT的關系。
h拆座、ASCT2敲低或miR-137過表達后檢測谷氨酰胺的消耗主巍。
i、對miR-137抑制后檢測谷氨酰胺的代謝活性挪凑，表明miR-137抑制后孕索，谷氨酰胺代謝增強。
Figure2說明的是甲基化酶MeCP2岖赋、DNMT1檬果、DNMT3B結合到miR-137啟動子CpG島使DNA甲基化，抑制miR-137的表達唐断，從而降低谷氨酸代謝选脊。
a、 CHIP實驗脸甘，分別用MeCP2恳啥、DNMT1和DNMT3B抗體釣取細胞中與蛋白結合的DNA片段，然后進行q-pcr驗證丹诀，表明這幾種蛋白結合到miR-137啟動子的CpG島钝的。
b、 對MeCP2敲低后檢測miR-137表達铆遭，表明MeCP2抑制miR-137的表達硝桩。
c、 對MeCP2敲低后檢測ASCT2的表達枚荣，表明MeCP2促進ASCT2的表達碗脊。
d-e、用甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR處理細胞后檢測miR-137和ASCT2的表達橄妆，表明5-Aza-CdR使miR-137表達升高而使ASCT2表達降低衙伶。
f-g祈坠、MeCP2敲低或用甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR處理細胞后檢測谷氨酰胺代謝，表明MeCP2降低后谷氨酰胺代謝降低矢劲。
參考文獻：J Dong,D Xiao,Z Zhao,et al.Epigenetic silencing of microRNA-137 enhances ASCT2 expression and tumor glutamine metabolism. Oncogenesis,2017,6,e356
