質(zhì)譜技術(shù)和流式技術(shù)的完美結(jié)合
CyTOF 質(zhì)譜流式細胞儀利用重金屬同位素作為抗體標簽芝雪，利用質(zhì)譜技術(shù)對細胞蛋白進行定量檢測褥琐。
該技術(shù)的應(yīng)用一方面使流式檢測通道數(shù)量大幅提高到了上百個，提升了從單個樣品獲得的信息量货葬；另一方面避免了通道間信號的干擾图云，大大簡化了實驗設(shè)計渤早，提升了數(shù)據(jù)的可靠性起宽。
通道的增加意味著可以對細胞亞型進行更精準的分群洲胖，也意味著可以對細胞內(nèi)信號通路進行更加全面的分析；單次實驗可捕獲百萬級別的單細胞坯沪，避免遺漏小亞群绿映。廣度和深度的綜合，
使得質(zhì)譜流式成為單細胞水平蛋白組學(xué)研究不可或缺的工具腐晾。
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靈敏度高叉弦、應(yīng)用范圍廣
Helios 質(zhì)譜流式系統(tǒng)對信號分辨率極高，可同時檢測上百種不同的標簽藻糖。質(zhì)譜流式可以同時獲得單細胞表面 Marker淹冰、胞內(nèi)信號通路、轉(zhuǎn)錄因子颖御、細胞因子榄棵、細胞周期等等各方面的信 息，在造血潘拱、免疫疹鳄、干細胞、癌癥以及藥物篩選等多個領(lǐng)域的研究中有著廣泛的應(yīng)用芦岂。
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科學(xué)方案設(shè)計
從抗體 Panel 設(shè)計到數(shù)據(jù)分析瘪弓，每一步都經(jīng)過科學(xué)、縝密的設(shè)計禽最，以保障高質(zhì)量研究成果腺怯。
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常見問題
Q
- 傳統(tǒng)流式和質(zhì)譜流式有哪些不同之處？
（1）標簽系統(tǒng)的不同：前者主要使用各種熒光基團作為抗體的標簽川无，后者則使用各種金屬元素作為標簽呛占。
（2）檢測系統(tǒng)的不同：前者使用激光器和光電倍增管作為檢測手段，而后者使用 ICP 質(zhì)譜技術(shù)作為檢測手段懦趋。
Q
- 質(zhì)譜流式比傳統(tǒng)流式有哪些優(yōu)勢晾虑？
（1）通道數(shù)量增加到上百個。ICP 質(zhì)譜裝置具有非常寬的原子量檢測范圍（75~209 Da）仅叫，可以同時檢測上百個不同的參數(shù)帜篇。
（2）通道間無干擾，無需計算補償诫咱。
（3）采用獨特的金屬標簽抗體笙隙。由于細胞本身不含這些作為標簽的金屬元素，沒有傳統(tǒng)流式的“自發(fā)熒光”坎缭，因此信號背景極低竟痰。
（4）多樣化的數(shù)據(jù)處理方式签钩，實現(xiàn)對樣品的深入分析。
Q
- 質(zhì)譜流式的樣本如何制備凯亮？
質(zhì)譜流式技術(shù)所需樣本為單細胞懸液边臼。下面的制備流程以 PBMC 為例：
（1）PBMC 細胞分離。推薦用肝素或者檸檬酸鹽作為抗凝劑抽提全血假消，并在4小時內(nèi)使用Ficoll 或者 Percol 密度梯度離心法分離出 PBMC柠并。注意需要盡量去除紅細胞；
（2）順鉑染色富拗。順鉑可用于區(qū)分死活細胞臼予，推薦加入1 uL 終濃度為5 uM 的順鉑，37℃孵育5分鐘后加入2~5倍體積的 Cell Staining Buffer啃沪，中止反應(yīng)粘拾。其后以300 g的轉(zhuǎn)速離心5分鐘， 棄上清后使用 Cell Staining Buffer 或細胞培養(yǎng)基重懸細胞创千；
（3）細胞刺激（可選）缰雇。將細胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱培養(yǎng)15~30 min，隨后使用相應(yīng)刺激物進行分組刺激追驴。刺激后的細胞轉(zhuǎn)至離心管械哟，離心后使用 Cell Staining Buffer 稀釋至1 mL； 注：此步根據(jù)具體需要殿雪，短時間的信號通路刺激可以按上述步驟進行暇咆；如果做數(shù)小時的胞內(nèi) Cytokine，該步驟應(yīng)該放在染順鉑之前丙曙。
（4）細胞固定爸业。使用2× 的 fixation buffer（含3.2% PFA 的 PBS）進行固定；
（5）將固定后的樣品保存在-80℃亏镰。
經(jīng)典案例
靶向 YAP 依賴的 MDSC 浸潤能夠阻礙腫瘤發(fā)展
Targeting YAP-Dependent MDSC Infiltration Impairs Tumor Progression
期刊: Cancer Discovery
影響因子:19.45
發(fā)表單位：德克薩斯大學(xué)安德森癌癥中心
發(fā)表時間: 2016年1月
研究背景
對前列腺癌細胞和腫瘤浸潤免疫細胞之間信號傳導(dǎo)機制的研究可能會開啟新的治療方法扯旷。
三、研究結(jié)果
1. 通過質(zhì)譜流式細胞分析技術(shù)對17個表面 Marker 進行分析索抓，解析了腫瘤組織中免疫細胞的亞群組成及其隨時間的變化趨勢薄霜。
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圖1 組間平均 beta 值差異火山圖
2. 紅色代表的是骨髓來源的抑制性細胞（MDSC），可以看到其比例隨時間明顯增大纸兔，提示 MDSC 在腫瘤發(fā)生過程中具有重要的作用。
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研究結(jié)論
本研究通過質(zhì)譜流式對 PTEN 和 Smad4 缺失的前列腺癌模型進行研究否副，發(fā)現(xiàn)腫瘤浸潤免疫細胞主要由 MDSC 組成汉矿，且其比例隨著癌癥的發(fā)展不斷增高。如果將此部分細胞剔除备禀，病程會 受到抑制洲拇。
閱讀原文：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4707102/
結(jié)果展示
SPADE分析
首先將表型類似的細胞聚成小群奈揍，然后依照各小群的表型相似度進行聚類分析，最后得到一個樹形圖赋续。
每個節(jié)點都是由一群表型相似的細胞構(gòu)成的男翰，節(jié)點相對位置不同也體現(xiàn)了其表型的差異。
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viSNE 分析
盡可能保持信息不丟失的基礎(chǔ)上纽乱，將多維信息壓縮到二維蛾绎，這樣就可以用二維散點圖來展示高維數(shù)據(jù)的結(jié)構(gòu)。
可以看出鸦列，在 viSNE 圖譜中租冠，幾個主要免疫亞群各自聚群。
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Wanderlust 分析
Wanderlust 會根據(jù)每個細胞排列的位置賦予細胞一個 Wanderlust 值薯嗤，其大小就反映了分化程度顽爹。
以 B 細胞為例，0代表起點（造血干細胞）骆姐，1代表終點（Immature Naive B）镜粤，該數(shù)值越小說明細胞越原始。
有了這個工具玻褪，我們可以觀察 B 細胞分化過程中任意一個蛋白的表達變化肉渴，這些信息可以幫助我們找到分化過程中一些重要的事件。
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Flow-MAP 分析
將不同時間點的質(zhì)譜流式數(shù)據(jù)做降維分析归园，得到的圖譜反映了細胞表型隨時間的變化黄虱。
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Citrus 分析
臨床樣本具有很大的異質(zhì)性，比較有規(guī)律性庸诱、代表性的差別往往只存在于少數(shù)亞群中捻浦。Citrus 可分析識別出這些特征性亞群。
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聚類熱圖
聚類熱圖可以簡單地聚合大量數(shù)據(jù)桥爽，直觀地展現(xiàn)數(shù)據(jù)的頻率高低朱灿。
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二維散點圖
用來呈現(xiàn)數(shù)據(jù)點的分布，表現(xiàn)兩個元素的相關(guān)性钠四。
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