一活烙、包埋實(shí)驗器材和試劑
1、試劑
酒精驱显、苯醇硼瓣、二甲苯、苯蠟倘感、 純蠟放坏。
2、器材
鑷子老玛、解剖刀淤年、解剖剪、包埋盒蜡豹、洗脫瓶麸粮、酒精燈、冰镜廉、切片機(jī)弄诲、烘片機(jī)、浸蠟瓶娇唯。
二齐遵、步驟
1.取材
將舌鰨性腺從酒精中取出放在實(shí)驗臺上凤巨，用鑷子夾住性腺的一端進(jìn)行橫切，取材長度2-3mm洛搀，放入包埋盒中脫水敢茁。注意編號
2.脫水
將包埋盒放入盛有酒精的洗脫瓶中按酒精濃度梯度脫水?
70%酒精（45min/1h）→80%酒精（45min/1h）→90%酒精（45min/1h）→100%酒精（40min）
3.透明
1:1苯醇（40min) →二甲苯（30min）?
4. 浸蠟（恒溫箱62℃、1天）
1:1苯蠟（45min/1h）→純蠟1（45min/1h）→純蠟2（45min/1h）
包埋時間表：
步驟：
70%酒精（45min/1h）→ 80%酒精（45min/1h）→90%酒精（45min/1h）? → 100%酒精（40min）→ 1:1苯醇（40min)? → 二甲苯（30min）→? 1:1苯蠟（45min/1h） → 純蠟1（45min/1h）→純蠟2（45min/1h）
5.包埋
用加熱的鑷子將材料放入包埋盒中留美，橫切面向下彰檬，倒入熔融的石蠟，用加熱的鑷子迅速將材料按所需的切面擺放整齊谎砾，待包埋盒表面的石蠟?zāi)毯髮窈衅椒湃氡蟹瓯叮故炑杆倌獭Ｗ詈髲陌窈兄腥〕鱿瀴K景图，以便保存较雕。將樣品編號封于蠟塊上，以免樣品混淆挚币。
6.修塊
將已包埋好的含有包埋材料的蠟塊用單面刀切成梯形小塊亮蒋，并可粗視到材料切面
7.切片
用切片機(jī)將蠟塊切成連續(xù)的蠟帶。切片時先把切片刀夾在刀架上妆毕，再把載蠟器夾在固定裝置上（注意安裝切刀的角度慎玖，刀口運(yùn)行方向與材料切面平行），然后調(diào)整好所需厚度笛粘，5微米趁怔，轉(zhuǎn)動切片機(jī)切片。
8.粘片
切下來的切片經(jīng)過目檢薪前，將符合要求的切片粘在潔凈的載玻片上润努。粘片時先在載玻片上涂上少量甘油蛋白（可用蛋青和甘油各50ml，加1g 水楊酸混合而成）示括，加幾滴蒸餾水铺浇，然后用鑷子小心把切片放在水上，在40℃下例诀，用撥針將切片伸直随抠、展平裁着，并烘干繁涂。
9.染色
見染色流程
切片染色流程
1、二甲苯Ⅰ? ? ? ? 15min? ?
2二驰、二甲苯Ⅱ? ? ? ? 15min
3扔罪、1:1苯醇? ? ? ? ? 5min
4、無水乙醇? ? ? ? ? 2min
5桶雀、90%乙醇? ? ? ? ? 2min
6矿酵、80%乙醇? ? ? ? ? 2min
7唬复、70%乙醇? ? ? ? ? 2min
8、50乙醇? ? ? ? ? ? 2min
9全肮、30%乙醇? ? ? ? ? 2min
10敞咧、自來水? ? ? ? ? 2min
11、蒸餾水? ? ? ? ? 2min
12辜腺、蘇木素? ? ? ? ? 10min
13休建、自來水? ? ? ? ? 5min
14、蒸餾水? ? ? ? ? 2min
15评疗、鹽酸分化液? ? ? 5s
16测砂、自來水? ? ? ? ? 10min
17、蒸餾水? ? ? ? ? 2min
18百匆、30%乙醇? ? ? ? 2min
19砌些、50乙醇? ? ? ? ? 2min
20、70%乙醇? ? ? ? 2min
21加匈、80%乙醇? ? ? ? 2min
22存璃、伊紅? ? ? ? ? ? 40s
23、90%乙醇? ? ? ? 2min
24雕拼、95%乙醇? ? ? ? 2min
25有巧、無水乙醇Ⅰ? ? ? 2min
26、無水乙醇Ⅱ? ? ? 2min
27悲没、1：1苯醇? ? ? ? 2min
28篮迎、二甲苯Ⅰ? ? ? ? 5min?
29、二甲苯Ⅰ? ? ? ? 5min
10.樹膠封片示姿、鏡檢甜橱、保存
附：
· 固定的目的
1迅速阻止組織、細(xì)胞的死后變化栈戳，防止自溶與腐敗岂傲，使之盡量保持生前的狀態(tài)與結(jié)構(gòu)。
2使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)子檀、脂肪镊掖、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)褂痰，以保持其原有狀態(tài)亩进。
3使組織內(nèi)各種物質(zhì)成分產(chǎn)生不同的折光率，以便染色后易于鑒別和觀察缩歪。
4使組織塊硬化归薛，從而在脫水、包埋、切片主籍、染色等過程中不易損壞习贫。
5使組織成分對染料有不同的親和力，經(jīng)過染色處理后易于辨認(rèn)千元。
6防止細(xì)胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態(tài)結(jié)構(gòu)苫昌。
· 固定的注意事項及影響因素
1固定液的用量
應(yīng)充足，一般為組織塊體積的10-20倍左右幸海。瓶底墊上脫脂棉或幾層濾紙更好蜡歹。以便固定液能從上下左右前后滲入組織塊。軟組織或較大塊組織可以經(jīng)2-3小時固定后涕烧，再修整成小塊重新投入新配制的固定液內(nèi)繼續(xù)固定月而。
2固定時間
應(yīng)根據(jù)組織的種類、性質(zhì)议纯、大小父款，……滲透力的強(qiáng)弱而定。
如：一般組織瞻凤，以10%福爾馬林固定24h……
適當(dāng)?shù)卦黾訙囟瓤煽s短固定時間憨攒。
· 常用固定液：
固定液特點(diǎn)：
①有較強(qiáng)的滲透力，能迅速的滲入組織內(nèi)部阀参；
②不使組織過度收縮或膨脹肝集，并能使組織內(nèi)待觀察的成分凝固因為不溶性物質(zhì)；
③能使組織達(dá)到一定的硬度并獲得較佳的折光率和對某種染料具有較強(qiáng)的親和力蛛壳。
（1）單純固定液
甲醛? ? 10ml
蒸餾水? 90ml
優(yōu)點(diǎn)：滲透能力強(qiáng)杏瞻，固定均勻，組織收縮小衙荐。
缺點(diǎn)：但經(jīng)乙醇脫水后收縮較大捞挥。
· 酒精脫水注意事項：
1一般從70%酒精開始，由低濃度到高濃度逐步處理忧吟，如果固定液為酒精溶液砌函，那就從與固定液中相同濃度的酒精開始脫水。
2對一些柔軟組織溜族，如胚胎組織讹俊，應(yīng)從70%酒精以下50%或30%開始脫水。
3脫水的時間根據(jù)組織的種類煌抒、體積大小和厚度而定仍劈，一般與組織的大小成正比。
脫水必須在有蓋瓶子內(nèi)進(jìn)行摧玫，特別是高濃度酒精耳奕。
脫水兼透明脫水劑：脫水后直接可以浸蠟
10玻片的清洗
新的載绑青、蓋玻片：必須經(jīng)清潔液處理后方能使用诬像，方法是先用自來水沖洗或洗衣粉擦拭沖洗后屋群，再入清潔液浸泡一天以上，取出經(jīng)清水沖洗坏挠，轉(zhuǎn)入95%酒精內(nèi)浸泡脫脂后芍躏，用干凈的棉布及綢布擦干備用，一般玻璃儀器可放入干燥箱內(nèi)烤干備用降狠。
經(jīng)染色并封片后的載玻片：可先在酒精燈上加溫以除去或放入大量廢二甲苯浸泡一周左右对竣，蓋玻片即能與載玻片自然分離，然后投入堿皂水中煮沸榜配，用自來水沖洗后否纬，按新玻片處理法處理。
浸蠟步驟：
1:1二甲苯和石蠟(30-45min)→石蠟(30-45min)→石蠟(30min)
包埋步驟：
? ? 將熔化好的石蠟倒入包埋組或包埋盒蛋褥，用加溫的鑷子將組織塊切面朝下放入临燃，做好標(biāo)記，冷卻烙心，完全凝固后膜廊，修整蠟塊。
包埋溫度：與浸蠟溫度接近或高2℃左右淫茵。
