? 1肴楷、驗(yàn)證microRNA同mRNA靶向互作严拒。將待測基因的3’UTR序列插入報(bào)告基因載體扬绪，再共轉(zhuǎn)入該microRNA，檢測熒光素酶活性下降裤唠，則提示為其靶序列挤牛。
2、驗(yàn)證microRNA同lncRNA靶向互作巧骚。將待測lncRNA序列插入報(bào)告基因載體的3’UTR區(qū)域赊颠，檢測熒光素酶活性格二。
3、啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析竣蹦。將啟動(dòng)子區(qū)域(約2k左右)進(jìn)行分段截短或突變顶猜，構(gòu)建入報(bào)告基因載體，檢測熒光素酶活性痘括。
4长窄、啟動(dòng)子SNP分析。一些基因的啟動(dòng)子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性纲菌，可運(yùn)用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析其相對(duì)活性挠日。
5、驗(yàn)證信號(hào)通路是否激活翰舌。將該信號(hào)通路的下游相應(yīng)原件序列構(gòu)建入報(bào)告基因載體嚣潜，檢測不同上游條件下，其熒光素酶活性椅贱，即下游信號(hào)通路的響應(yīng)情況懂算。
例子1
構(gòu)建pGreenH0800-PuGSTU17-LUC和pGreenI0800-PuPLA2-LUC載體
LUC酶活測定實(shí)驗(yàn)表明: PuHSFA4a能夠激活PuGSTU17和PuPLA2的啟動(dòng)子導(dǎo)致
這兩個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。? ? ?參考東北林業(yè)大學(xué)博士論文庇麦。2019-03
例子2
為了明確CsATAF1對(duì)下游基因的激活或抑制作用计技，利用煙草葉片注射和黃瓜原生質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，對(duì)下游基因的激活進(jìn)行檢測山橄，結(jié)果表明垮媒，CsATAF1激活了CsDREB2C, CsCu-ZnSOD， CsABI5的表達(dá)航棱， 促進(jìn)了下游報(bào)告基因的表達(dá)睡雇。
例子3：
?完整的ALMTI啟動(dòng)子(P1) 和5'端缺失的啟動(dòng)子(P2)被克隆后構(gòu)建到報(bào)告載體中(如圖5-11b), 分別與35S啟動(dòng)子帶動(dòng)的WRKY46一起侵染煙草葉片。結(jié)果顯示丧诺，WRKY46明顯抑制由完整ALMTI啟動(dòng)子(P1) 帶動(dòng)的熒光素酶的活性入桂，但不影響5'端缺失的啟動(dòng)子(P2) 帶動(dòng)的熒光素酶活性， 說明缺失的啟動(dòng)子序列(含6個(gè)W-box 元件)對(duì)WRKY46與ALMTI啟動(dòng)子的相互作用至關(guān)重要驳阎。
例子4
例子5---啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析抗愁。將啟動(dòng)子區(qū)域(約2k左右)進(jìn)行分段截短或突變，構(gòu)建入報(bào)告基因載體呵晚，檢測熒光素酶活性蜘腌。
蘋果U6啟動(dòng)子的克隆及功能分析
本試驗(yàn)以pYLsgRNA-At U6-1質(zhì)粒為模板克隆長度為301 bp的At U6-1啟動(dòng)子（表1），并連接至p GreenII-0800-LUC載體饵隙，命名為At U6-1P::LUC撮珠。不同U6啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)熒光素酶基因的融合表達(dá)載體示意圖如圖
詳細(xì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果參考：蘋果U6啟動(dòng)子的克隆及功能分析 - 中國知網(wǎng)
例子6
然后分別取材按照雙熒光素酶試劑盒試驗(yàn)步驟測量不同樣品中LUC及REN的熒光值并計(jì)算每種樣品中LUC/REN比值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)a組與b組熒光比值都很低金矛，說明試驗(yàn)操作及煙草生長狀態(tài)良好芯急。而d組相對(duì)于c組比值下降了3.5 倍左右勺届，說明轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32抑制AtGA20oxl的表達(dá)(圖2.6B)。通過分析過表達(dá)株系中AtGA20ox1基因的表達(dá)娶耍，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)株系中AtGA20ox1基因的表達(dá)相對(duì)于野生型來說均有不同程度的下降免姿，進(jìn)一步驗(yàn)證了轉(zhuǎn)錄因子AtMYB32對(duì)AtGA20oxl的抑制作用(圖2.6C)。
