1. 將組織在液氮中磨碎西疤，每 50～100mg 組織加入 1ml TRIzol对室，用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理隧甚。樣品體積不應(yīng)超過(guò) TRIzol 體積 10℅拉宗。
2. 可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪辣辫，多糖或胞外物質(zhì)旦事。可于 2～8℃ 10000× g 離心 10min急灭，取上清姐浮。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖葬馋，高分子量 DNA卖鲤，上清中含有 RNA。處理脂肪組織時(shí)畴嘶，上層有大量油脂應(yīng)去除蛋逾。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
3. 每 1ml TRIzol 加入 0.2ml 氯仿窗悯，劇烈振蕩 15s区匣，室溫放置 5min。
4. 2～8℃ 10000×g 離心 15min蒋院。樣品分為三層亏钩。RNA 主要在水相中，水相體積約為所用 TRIzol 試劑的 60℅欺旧。
5. 把水相轉(zhuǎn)移到新的 EP 管中加入等體積的異丙醇姑丑，室溫放置 10min。
6. 2～8℃ 10000×g 離心 10min辞友，離心前看不出 RNA 沉淀栅哀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀白色沉淀。棄上清進(jìn)行下一步操作。
7. 用 75℅冰預(yù)冷的乙醇洗滌 RNA 沉淀昌屉。每使用 1ml TRIzol 至少加 1ml 75℅乙醇钙蒙。
2～8℃ 不超過(guò) 7500×g 離心 5min，棄上清间驮。
8. 超凈臺(tái)中風(fēng)干大約 5～10min躬厌。不要過(guò)于干燥，否則會(huì)導(dǎo)致 RNA 的溶解性大大降低竞帽。加入 25～200μl 無(wú) RNase 的水使 RNA 溶解扛施。
