培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn)嗓袱，是污染嗎
一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則阵面，是否運(yùn)動(dòng)，是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng)逼肯。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動(dòng)桃煎，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的)篮幢，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物为迈。如果黑點(diǎn)大小一致三椿，快速移動(dòng)，很可能是細(xì)菌污染葫辐。
如果細(xì)胞被污染搜锰，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃耿战、變混濁蛋叼。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等剂陡。 如果在鏡下觀察細(xì)胞狈涮，生長狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比鸭栖，沒有任何變化歌馍。
那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)
1.細(xì)胞生長過老晕鹊，破碎的細(xì)胞殘骸
2.血清質(zhì)量不好松却，反復(fù)凍融的結(jié)果
3.配制培養(yǎng)基的pH值偏高暴浦，不宜細(xì)胞生長
4.配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格
如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)的產(chǎn)生
掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī)晓锻，不要細(xì)胞長老了再傳代;掌握好消化時(shí)間歌焦，防止消化過度產(chǎn)生細(xì)胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到最佳;嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔。
黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了砚哆，如何進(jìn)行處理
如果判定黑點(diǎn)是污染同规，請(qǐng)及時(shí)將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況窟社，可參照以下進(jìn)行：
如果是懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞上清慢速離心（500-600 rpm/min，5-6 min）并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS洗2-3遍绪钥，洗的時(shí)候灿里，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落程腹，再棄去PBS匣吊，消化時(shí)先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來寸潦，去掉低濃度胰酶色鸳，然后正常消化細(xì)胞，將收集的細(xì)胞懸液慢速離心（500-600 rpm/min见转，5-6 min）并更換新的培養(yǎng)瓶命雀，并可以嘗試適當(dāng)增加血清濃度進(jìn)行培養(yǎng)。
