在熒光檢測(cè)領(lǐng)域剔宪，自發(fā)熒光（Autofluorescence, AF）是一種常見(jiàn)的背景熒光現(xiàn)象拂铡，可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成干擾。今天葱绒，我們將深入探討自發(fā)熒光的來(lái)源以及如何應(yīng)對(duì)這一挑戰(zhàn)感帅。
自發(fā)熒光指的是樣本在熒光檢測(cè)過(guò)程中產(chǎn)生的非特異性背景熒光信號(hào)，這些信號(hào)與研究的目標(biāo)信號(hào)無(wú)關(guān)地淀，可能對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)產(chǎn)生干擾失球。
對(duì)于組織本身而言，自發(fā)熒光的來(lái)源主要包括以下幾種：
NADH和NADPH：這兩種輔酶常見(jiàn)于細(xì)胞的代謝過(guò)程中帮毁，會(huì)發(fā)出特定的熒光信號(hào)实苞，利用熒光壽命成像(FLIM)可以定量區(qū)分這兩個(gè)輔因子。
彈性蛋白和膠原蛋白：這些細(xì)胞外基質(zhì)成分也具有自發(fā)熒光特性烈疚。
紅細(xì)胞的卟啉結(jié)構(gòu)：卟啉的自發(fā)熒光可能會(huì)影響血液樣本的熒光檢測(cè)黔牵。
脂褐素：尤其在衰老個(gè)體中，脂褐素及其類似物的積累會(huì)產(chǎn)生顯著的自發(fā)熒光爷肝。
生物分子：維生素B2猾浦、色氨酸陆错、酪氨酸等都可能產(chǎn)生自發(fā)熒光。
在植物樣本中金赦，自發(fā)熒光主要由以下成分引起：
葉綠素：在植物細(xì)胞中音瓷，葉綠素的自發(fā)熒光是最為常見(jiàn)的。
木質(zhì)素：植物細(xì)胞壁中的木質(zhì)素也會(huì)產(chǎn)生顯著的自發(fā)熒光夹抗。
其它化合物：如阿魏酸绳慎、角質(zhì)素、木栓質(zhì)兔朦、孢粉質(zhì)及黃酮類化合物等偷线，均可能導(dǎo)致植物樣本中的自發(fā)熒光[1]。
組織處理過(guò)程的影響：戊二醛沽甥、多聚甲醛以及甲醛固定會(huì)造成不同程度的自發(fā)熒光背景声邦。例如，戊二醛固定會(huì)導(dǎo)致顯著的自發(fā)熒光增強(qiáng)摆舟，這是由于戊二醛與蛋白質(zhì)及肽反應(yīng)生成的近紅外熒光物質(zhì)亥曹，分子中的乙二胺和仲胺是形成Cy3 類似物的關(guān)鍵成分[2]。
除了生物樣本恨诱，其他類型樣本中也可能存在自發(fā)熒光媳瞪，如：
合成材料：某些合成材料在特定波長(zhǎng)的激發(fā)下可能產(chǎn)生自發(fā)熒光。
環(huán)境樣品：如土壤照宝、空氣樣本中也可能含有熒光物質(zhì)蛇受，影響檢測(cè)結(jié)果。
相關(guān)資料顯示厕鹃，自發(fā)熒光對(duì)于臨床具有潛在的應(yīng)用價(jià)值[3]兢仰，但在某些情況下，自發(fā)熒光不僅會(huì)增加背景噪音剂碴，還可能掩蓋或干擾目標(biāo)信號(hào)的檢測(cè)把将，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成一定干擾，應(yīng)對(duì)自發(fā)熒光的挑戰(zhàn)忆矛，研究者們采用了多種方法來(lái)減小其干擾：
1.物理方法
光漂白：紫外線照射可有效降低自發(fā)熒光察蹲，例如照射腎臟、肝臟和胰腺切片中的自發(fā)熒光催训，但需注意高強(qiáng)度光照可能會(huì)導(dǎo)致組織成分的光氧化洽议。
2.化學(xué)方法
組織透明化：通過(guò)化學(xué)處理，使組織變得透明漫拭，降低背景熒光绞铃。
暗淬滅：使用如蘇丹黑B等化學(xué)試劑在熒光染色前后處理樣本，減少自發(fā)熒光嫂侍。
還原劑處理：使用氨乙醇儿捧、硼氫化鈉等還原劑荚坞，可有效減少自發(fā)熒光的產(chǎn)生。
專用試劑盒：針對(duì)不同熒光類型菲盾，市面上有多種試劑盒可用于處理自發(fā)熒光颓影。
3.算法扣除
數(shù)字圖像處理：應(yīng)用特定算法從圖像中去除自發(fā)熒光信號(hào)，可以兼容多種熒光基團(tuán)懒鉴，提升實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性[4]诡挂。
結(jié)語(yǔ)
自發(fā)熒光是熒光檢測(cè)中的一個(gè)重要挑戰(zhàn)，但通過(guò)合理選擇和應(yīng)用上述減弱方法临谱，我們可以有效減少其干擾璃俗，從而獲得更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，幫助我們更好地減少自發(fā)熒光帶來(lái)的困擾悉默。
希望這篇文章對(duì)你了解自發(fā)熒光的來(lái)源及處理方法有所幫助城豁。如果你有任何問(wèn)題或需要進(jìn)一步的信息，歡迎留言討論抄课！
參考文獻(xiàn)
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