血液游離DNA（又稱血液循環(huán)DNA）是指血液中游離于細(xì)胞外的DNA，其來(lái)源主要有三：白細(xì)胞崩解釋放的DNA交洗、壞死組織特別是腫瘤組織釋放入血液的DNA和感染病毒骑科、細(xì)菌的DNA。近幾年來(lái)构拳，隨著基因診斷技術(shù)的發(fā)展咆爽，游離核酸的應(yīng)用價(jià)值越來(lái)越大，如優(yōu)生篩查置森、腫瘤早期診斷斗埂、遺傳病檢測(cè)和病原體感染基因檢測(cè)等。但血液中游離DNA含量一般較低凫海，片段較小呛凶，不易提取，這大大影響了游離核酸的基因檢測(cè)和各種研究的開(kāi)展行贪。

游離DNA提取方法一般有TRizol方法漾稀、離心柱法、磁珠法建瘫。其中崭捍，Trizol方法與離心柱相比，提取效果相當(dāng)啰脚，但是因其對(duì)操作者帶來(lái)的毒性殷蛇，現(xiàn)在越來(lái)越被棄用。磁珠法比較適合機(jī)器自動(dòng)化提取橄浓，如果沒(méi)有核酸提取儀粒梦，只是使用磁力架配套提取，磁珠法的操作就比較麻煩且容易導(dǎo)致樣本交叉污染荸实。另外匀们，根據(jù)研究，磁珠法的核酸提取得率不如離心柱法泪勒。如果要提取的游離核酸的量比較低昼蛀，最好選擇離心柱法。對(duì)于游離DNA含量較低的樣本或比較珍貴的樣本或樣本總數(shù)不是很多的實(shí)驗(yàn)室圆存，首選的核酸提取方法應(yīng)是離心柱法叼旋。

離心柱法游離DNA提取原理主要是樣本裂解后，DNA在高鹽條件下與硅膠膜結(jié)合沦辙，再在低鹽夫植、高PH值時(shí)將DNA從硅膠膜上洗脫下來(lái)。面對(duì)各種品牌的離心柱法提取試劑盒，哪種才是最適合的呢详民？目前國(guó)內(nèi)常用的離心柱法游離DNA提取試劑盒有國(guó)內(nèi)品牌Biog延欠、國(guó)際品牌Q、國(guó)內(nèi)品牌T等沈跨。我們以下就幾種游離DNA提取試劑盒進(jìn)行比較由捎。

[if !supportLists]一、[endif]有較高的提取得率饿凛。核酸提取得率的確定狞玛，常用的是使用紫外分光光度計(jì)的方法。但是涧窒，血清心肪、血漿樣本中游離核酸含量較低，如果直接用紫外法檢測(cè)纠吴，得出的數(shù)值并不準(zhǔn)確硬鞍，而且多次測(cè)量的結(jié)果會(huì)變異很大。關(guān)于提取得率戴已，Qiagen的研究數(shù)據(jù)是1ml正常血漿樣本cfDNA得為7.35ng左右固该，但如果白細(xì)胞大量凋亡，血漿中的游離DNA量會(huì)有所增加恭陡，腫瘤病人血漿中的DNA會(huì)大幅增加蹬音。有些研究者提取血漿核酸后習(xí)慣于先用紫外檢測(cè)濃度上煤，發(fā)現(xiàn)紫外檢測(cè)不出來(lái)或濃度很低時(shí)便認(rèn)為提取失敗休玩，放棄后面進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)，其實(shí)并不可取劫狠。我們可以把紫外讀數(shù)作為參考拴疤，但是不能作為判斷得率的唯一標(biāo)準(zhǔn)，最好還是要做個(gè)PCR或熒光定量独泞。根據(jù)Qiagen公司的實(shí)驗(yàn)呐矾，血清血漿的量與提取的核酸量成正比。因而懦砂，如果要提高核酸得率蜒犯，可通過(guò)增加血清或血漿的量來(lái)實(shí)現(xiàn)。一般地荞膘，做血漿或血清核酸提取罚随，樣本量最好在1ml以上。如果1ml或更大量樣本得不到滿意的檢測(cè)結(jié)果羽资，則應(yīng)及時(shí)考慮更換提取試劑盒淘菩。目前國(guó)內(nèi)常用的血漿核酸提取試劑有國(guó)際品牌Q、國(guó)內(nèi)品牌T屠升、國(guó)產(chǎn)品牌Biog等潮改，我們實(shí)驗(yàn)室使用下來(lái)狭郑，Biog的核酸提取得率較高，1ml肺癌病人血漿樣本DNA得率在85ng左右汇在，Q的得率在72ng左右翰萨，T的得率在63ng左右，基本上都能滿足下游PCR實(shí)驗(yàn)的需求糕殉。當(dāng)然缨历，如此低的濃度直接測(cè)OD值不太容易，如果使用Nanodrop2000c糙麦，其檢測(cè)下限為2ng/ul辛孵。如洗脫液為30ul，則需要1ml左右的血漿才能檢測(cè)出來(lái)赡磅。顯然魄缚，如果是健康人的血漿，1ml血漿的DNA濃度更低焚廊，紫外可能根本就檢測(cè)不出來(lái)冶匹。因而，血漿DNA提取完成以后咆瘟，最好直接做PCR嚼隘，紫外檢測(cè)的意義不大。

[if !supportLists]二袒餐、[endif]提取的核酸純度高飞蛹。核酸純度一般根據(jù)OD260/OD280比值來(lái)判斷。一般說(shuō)來(lái)灸眼，試劑盒提取的DNA 其OD260/OD280比值應(yīng)在1.6--1.8之間卧檐。如果提取的DNA溶液OD260/OD280比值小于1.6，通常說(shuō)明有蛋白質(zhì)或酚焰宣、多糖等的污染霉囚。如果提取的DNA溶液OD260/OD280>1.9,則表明有RNA污染。使用Q公司血漿DNA提取試劑盒提取的血漿DNA, OD260/OD280一般在1.7-1.9之間匕积；使用Biog血漿游離DNA提取試劑盒提取的血漿DNA, OD260/OD280一般在1.6-1.9之間盈罐，使用T公司血漿DNA提取試劑盒提取的血漿DNA OD260/OD280比值也在1.6-1.9之間。Q公司提取DNA的純度似乎優(yōu)于國(guó)產(chǎn)試劑闪唆，但我們提取的DNA是用于PCR檢測(cè)盅粪，結(jié)果并無(wú)明顯影響“可能因?yàn)锽公司血漿游離DNA提取試劑盒提取的血漿DNA量得率較高的原因湾揽，同樣的DNA加樣體積（2ul），Biog試劑盒提取的DNA 熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果CT值要小于Q公司試劑盒提取的DNA。

[if !supportLists]三库物、[endif]操作簡(jiǎn)便性霸旗。操作簡(jiǎn)便性也是血漿DNA提取試劑選擇的一個(gè)重要因素。操作過(guò)于復(fù)雜戚揭，不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力诱告，還容易導(dǎo)致樣本間的交叉污染，也容易損失樣本民晒。特別是用于臨床檢測(cè)或樣本較多情況下的檢測(cè)精居，操作復(fù)雜如果導(dǎo)致交叉污染會(huì)引起誤診，還會(huì)影響出檢測(cè)報(bào)告的時(shí)間潜必。因而靴姿，選用操作簡(jiǎn)便、流暢的提取試劑盒非常重要磁滚。就我們?cè)?jīng)用過(guò)的以上三種提取試劑盒來(lái)說(shuō)佛吓，Q公司的血漿DNA提取試劑盒提取過(guò)程大約30min，從樣本處理開(kāi)始需要個(gè)10步驟垂攘；T公司血清/血漿游離DNA提取試劑盒整個(gè)提取過(guò)程需要約40min维雇，從樣本開(kāi)始處理10個(gè)步驟；B公司的Biog血漿游離DNA提取試劑盒提取過(guò)程大約25min晒他，從樣本開(kāi)始處理8個(gè)步驟吱型，B公司的血漿游離DNA提取試劑盒在操作簡(jiǎn)便性上具有一定優(yōu)勢(shì)，更適合于較多樣本的檢測(cè)陨仅。據(jù)了解津滞，該產(chǎn)品已通過(guò)藥監(jiān)局備案，也更適合臨床樣本的檢測(cè)掂名。

綜合看來(lái)据沈，與國(guó)外知名品牌相比，國(guó)產(chǎn)試劑盒在血漿DNA提取純度上稍有不足饺蔑，但在提取得率和操作簡(jiǎn)便性上基本沒(méi)有區(qū)別，有些品牌還略有優(yōu)勢(shì)嗜诀，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行選擇猾警。對(duì)純度要求較高的實(shí)驗(yàn)，可選擇Q等國(guó)外知名品牌隆敢，如果對(duì)提取量要求較高或提取后主要進(jìn)行PCR或分子雜交之類的實(shí)驗(yàn)发皿，可考慮選擇Biog等國(guó)產(chǎn)品牌。