? “SDS-PAGE”是指“聚丙烯酰胺凝膠電泳”（polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱PAGE）。
? ? 原理：聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)困鸥，具有分子篩效應(yīng)。分為非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（Native-PAGE）和SDS-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）；非變性聚丙烯酰胺凝膠浪默，在電泳的過程中，蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)缀匕，并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小纳决、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。SDS-PAGE僅根據(jù)蛋白質(zhì)亞基分子量的不同就可以分開蛋白質(zhì)乡小。SDS-PAGE最初由shapiro于1967年建立阔加，他們發(fā)現(xiàn)在樣品介質(zhì)和丙烯酰胺凝膠中加入離子去污劑和強(qiáng)還原劑（SDS即十二烷基硫酸鈉）后，蛋白質(zhì)亞基的電泳遷移率主要取決于亞基分子量的大新印（可以忽略電荷因素）胜榔。
? ? 聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成，聚合過程由自由基催化完成湃番。催化聚合的常用方法有兩種：化學(xué)聚合法和光聚合法苗分。化學(xué)聚合（實(shí)驗(yàn)室常用）以過硫酸銨（APS）為催化劑牵辣，以四甲基乙二胺（TEMED）為加速劑摔癣。在聚合過程中，TEMED催化過硫酸銨產(chǎn)生自由基纬向，后者引發(fā)丙烯酰胺單體聚合择浊，同時(shí)甲叉雙丙烯酰胺與丙烯酰胺鏈間產(chǎn)生甲叉鍵交聯(lián)，從而形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)逾条。
? ? 制好一塊蛋白膠是WESTERN BLOT琢岩，PULL DOWN， Co-IP等實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)师脂。雖然是個(gè)很簡單的步驟担孔，但也有許多值得注意的地方。實(shí)驗(yàn)小白的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)吃警，大家可以參考參考糕篇。
? 1.制膠用的膠板和梳子需要提前用ddH2O清洗干凈。檢漏時(shí)可以開始配置分離膠酌心。
? 2.檢漏后需要用紙把水吸干凈拌消，避免有水殘留。
? 3.加入分離膠后用ddH2O封平安券，加水時(shí)用移液槍水平緩慢加入墩崩，一是為了使分離膠界面保持水平氓英，用水就可以把它壓平，使蛋白質(zhì)分子跑時(shí)在同一水平線上鹦筹；二是阻止空氣中的氧氣對凝膠聚合的抑制作用铝阐。封好后一般靜置15分鐘左右。等待時(shí)間可以制備濃縮膠铐拐。
? ? 4.待分離膠與水出現(xiàn)分層即表示分離膠凝固好了饰迹，吸干凈水（否則易導(dǎo)致濃縮膠與分離膠中間有空隙）。用移液器緩慢加入濃縮膠（不要有氣泡余舶，可以不用把移液器里的液體打干凈，這樣不容易有氣泡锹淌；有氣泡了可以加入更多液體使氣泡上浮再用移液器吸走氣泡）匿值，及時(shí)插入梳子，靜置15分子左右赂摆。
? ? 5.一般加入TEMED(劇毒,使用時(shí)注意）的量按使用說明的量加入挟憔，夏季溫度高時(shí)切勿多加。冬季溫度低時(shí)可適量多加2到5微烟号。
? 個(gè)人心得绊谭，僅供參考。如有疑問汪拥，歡迎交流达传。
