此項研究由克拉茲博士協(xié)同與香港浸會大學武氓，國立成功大學，中華醫(yī)事大學仇箱，奇美醫(yī)院等共同合作研究县恕，并且論文發(fā)表在國際期刊: Journal of Ethnopharmacology中發(fā)表。
在這項研究中剂桥，固態(tài)培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝和木頭培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝顯著降低mRNA層級的促發(fā)炎基因忠烛，如IL-6和iNOS，并在本研究的皮膚缺血模型中权逗，降低 TNF-α美尸、NF-κB和IL-6的蛋白表現(xiàn)。
結果顯示斟薇，Dr.klatz牛樟芝降低發(fā)炎反應的 IL-6师坎、TNF-α、NF-κB和iNOS堪滨。研究顯示胯陋，Dr.klatz牛樟芝子實體和菌絲體的萃取物具有優(yōu)異的抗發(fā)炎的特性。其中，木頭培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝抗發(fā)炎的能力明顯優(yōu)于固態(tài)培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝和ST1遏乔。
研究目的：
在這項研究中义矛，以背部皮膚的皮瓣手術誘發(fā)小鼠皮膚缺血模式，來研究Dr.klatz牛樟芝(AC)與其活性化合物ST1 (ergostatrien-3β-ol) 的抗發(fā)炎效果盟萨。
因缺血/再灌流誘發(fā)的皮膚損傷是整形外科經(jīng)常觀察到的一種多因素過程(Wang凉翻，2009；Tamas et al.鸯旁，2010)噪矛。
缺血性損傷的過程包括：缺氧、發(fā)炎和氧化損傷 (Liu and McCullough铺罢，2013)艇挨。發(fā)炎是缺氧誘發(fā)的初始階段反應之一。皮膚缺血再灌注期間韭赘，活性氧(ROS) 的形成觸發(fā)脂質過氧化缩滨，并且破壞蛋白質和核酸 (Siemionow and Arslan，2004)泉瞻，造成氧化損傷脉漏。要減少皮膚因缺血造成的損傷，需要加強抑制發(fā)炎反應袖牙。
在這項研究中侧巨，我們著重于Dr.klatz牛樟芝椴木培養(yǎng)子實體、固態(tài)培養(yǎng)菌絲體和萃取物ST1在小鼠皮膚缺血模型中的抗發(fā)炎活性鞭达。
材料與方法：
選擇九周大的雄性小鼠司忱，并隨機將小鼠分為 6 組進行實驗(n=6)。
方法:?將小鼠背部皮膚拉起一個 U型皮瓣(3.5 cm長×1.5 cm寬)畴蹭，并對橫向胸動脈血管雙血管蒂進行切片坦仍，并將之縫合。
分組: 小鼠隨機分為六組進行治療(n=6)：
(1) 正常對照組叨襟，不接受任何處理 [正常皮膚/丙二醇(PG)繁扎，一種常用的醫(yī)療溶劑](2) 手術皮瓣/PG組: 皮瓣手術后涂抹PG丙二醇(3) 手術皮瓣/S-AC組: 皮瓣手術后涂抹 300 mg/kg 的Dr.klatz牛樟芝固態(tài)培養(yǎng)菌絲體(4) 手術皮瓣/W-AC組: 皮瓣手術后涂抹 300 mg/kg 的Dr.klatz牛樟芝木頭培養(yǎng)子實體(5) 手術皮瓣/H-ST1組: 皮瓣手術后涂抹高劑量 4mg/kg 的 ST1(6) 手術皮瓣/L-ST1組: 皮瓣手術后涂抹低劑量 2mg/kg B.W.的ST1
材料: Dr.klatz牛樟芝溶解于25μL 的PG，并每6小時涂抹在皮瓣上共24小時糊闽。實驗結束時梳玫，每只小鼠被麻醉，收集背部皮膚組織進行組織病理分析墓怀，按照我們之前報告中的方法提取RNA和蛋白質汽纠。
發(fā)炎與免疫反應
發(fā)炎是身體抵抗外來微生物侵略時所誘發(fā)的防御反應之一。
當體內(nèi)巨噬細胞被細菌活化時傀履，會誘發(fā)巨噬細胞產(chǎn)生免疫反應以及發(fā)炎作用，進而使細胞內(nèi)的一氧化氮合成酶（iNOS）釋出一氧化氮（NO）等發(fā)炎相關物質，包括 TNF-α钓账、IL-1碴犬、IL-6、NO 和 PGE2梆暮。
人體里適量的NO一氧化氮具有消滅外來細菌的作用服协，但NO對細胞具有毒性，也會造成組織細胞的損傷啦粹。當 TNF-α偿荷、IL-1、IL-6唠椭、NO 和 PGE2被過度產(chǎn)生時跳纳，則會造成體內(nèi)組織慢性的發(fā)炎反應或者是急性發(fā)炎反應，例如︰敗血性休克贪嫂。
在慢性發(fā)炎及感染之細胞組織寺庄，會有一系列細胞激素、酵素及訊息蛋白（signal protein）生成力崇。iNOS及COX-2分別可催化NO及PGs大量產(chǎn)生斗塘，不但造成組織發(fā)炎及并發(fā)敗血性休克，也使得慢性傳染擦裂ァ（例如：肺結核）及自體免疫性疾测擅恕（例如：風濕性關節(jié)炎）等疾病癥狀更加惡化。
未經(jīng)Dr.klatz牛樟芝處理的「手術皮瓣/ PG組」手術后72小時內(nèi)茧吊，因缺血損傷造成的病理組織改變
1. 手術后0小時
2. 圖B手術后12小時: 在表皮發(fā)現(xiàn)瀰漫性和嚴重凝固性壞死帶有輕微浸潤情形贞岭，但皮下沒有發(fā)炎細胞。
3.?圖C手術后 24小時:在表皮發(fā)現(xiàn)局部和中度凝固性壞死帶有發(fā)炎細胞浸潤饱狂，并在皮下發(fā)現(xiàn)中度發(fā)炎細胞和壞死帶有輕微發(fā)炎細胞浸潤曹步。
4. 圖D手術后72小時: 在表皮發(fā)現(xiàn)瀰漫性和嚴重凝固性壞死帶有發(fā)炎細胞浸潤，并在皮下發(fā)現(xiàn)輕微發(fā)炎細胞浸潤和壞死伴隨輕微水腫注:黃色「*」為凝固性壞死休讳，紅色「箭頭」為細胞發(fā)炎讲婚。
手術后24小時，以Dr.klatz牛樟芝處理缺血損傷之病理組織改變
1. 圖A正常對照組
2. 圖B手術皮瓣/ PG組: 手術后涂抹PG丙二醇俊柔，表皮程度約為 25-50%筹麸，而在皮下則為 25-75%的病變。
3. 圖C手術皮瓣/S-AC組: 手術后涂抹固態(tài)培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝雏婶，在表皮發(fā)現(xiàn)約為 1-25%物赶，皮下為 25% 的病變。
4. 圖D手術皮瓣/W-AC組: 手術后涂抹木頭培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝留晚，相較于固態(tài)培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝酵紫，木頭培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝在皮下較少發(fā)炎細胞浸潤。
5. 圖E手術皮瓣/H-ST1組: 手術后涂抹高劑量的ST1，相較于丙二醇組奖地，表皮呈現(xiàn)更嚴重的發(fā)炎細胞浸潤(25-100%)橄唬，但皮下則較少發(fā)炎細胞浸潤。
6. 圖F手術皮瓣/L-ST1組: 手術后涂抹低劑量的 ST1参歹，相較于與丙二醇組仰楚，表皮和皮下表現(xiàn)出較少的發(fā)炎細胞浸潤(分別為 1-25%以及 25-50%)
組織病理分析表明，木頭培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝犬庇、固態(tài)培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝和 ST1涂抹在受傷的皮瓣僧界，減少皮下發(fā)炎細胞浸潤和水腫的程度。木頭培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝減少發(fā)炎細胞浸潤和水腫的能力臭挽，大于固態(tài)培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝和ST1捂襟。然而，數(shù)據(jù)顯示埋哟，木頭培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝笆豁、固態(tài)培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝和 ST1 都具有顯著的抗發(fā)炎能力。
手術后24小時赤赊，由發(fā)炎細胞浸潤至真皮和皮下的病變程度
木頭培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝減少發(fā)炎細胞浸潤和水腫的能力闯狱，大于固態(tài)培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝和ST1。然而抛计，數(shù)據(jù)顯示哄孤，木頭培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝、固態(tài)培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝和ST1 都具有顯著的抗發(fā)炎能力吹截。
手術后24小時Dr.klatz牛樟芝降低iNOS和IL-6的轉錄表現(xiàn)
iNOS和IL-6的轉錄表現(xiàn)在缺血的皮膚中均明顯增加瘦陈，而Dr.klatz牛樟芝能降低iNOS和IL-6表現(xiàn)程度，尤其是木頭培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝(上圖)波俄。與丙二醇組比較:固態(tài)培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝組晨逝，iNOS的表現(xiàn)降低約 61%，IL-6 的表現(xiàn)分別降低約為 44%木頭培養(yǎng)Dr.klatz牛樟芝組懦铺，iNOS的表現(xiàn)降低約 58%捉貌，IL-6 的表現(xiàn)分別降低約為 85%
結果：
皮瓣誘發(fā)的缺血損傷顯著地增加 iNOS、COX2 和 IL-6 蛋白表現(xiàn)冬念，并減少 IκB 蛋白表現(xiàn)趁窃。此外，在皮瓣手術后的 24 個小時急前，在表皮組織發(fā)現(xiàn)局部中度凝固性壞死與發(fā)炎細胞浸潤醒陆；且在皮下組織注意到中度發(fā)炎細胞和壞死伴隨著輕微水腫。然而裆针，固態(tài)培養(yǎng)或木頭培養(yǎng)的Dr.klatz牛樟芝刨摩，或使用其衍生的 ST1 活性化合物寺晌，可顯著地降低皮瓣之真皮和皮下的壞死和發(fā)炎細胞浸潤。與對照組「手術皮瓣/PG組」相比較码邻，Dr.klatz牛樟芝實驗組可透過減少發(fā)炎相關基因的表現(xiàn)折剃，如：iNOS另假、IL-6像屋、TNF-α和 NF-κB，而減少發(fā)炎反應边篮。
結論：
這些結果證明Dr.klatz牛樟芝木頭培養(yǎng)子實體和固態(tài)培養(yǎng)菌絲體之甲醇萃取物己莺，具有優(yōu)異的抗發(fā)炎活性，因此具有很大的潛力作為加人工皮的添加物戈轿。
