以Entranster-E 電轉(zhuǎn)染試劑為例
一匿级、HepG2細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染條件是什么锐极？
使用Entranster-E電轉(zhuǎn)液與指數(shù)衰減脈沖電轉(zhuǎn)儀時HepG2細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染條件是：
對于0.2 cm電轉(zhuǎn)杯规伐，細(xì)胞密度為5×10^6 cells/ml涎劈，DNA用量為2μg荤崇，電轉(zhuǎn)液體積為100μl狭魂，電壓為170V罚攀， 電容為950μF。
對于0.4 cm電轉(zhuǎn)杯雌澄，細(xì)胞密度為5×10^6 cells/ml斋泄，DNA用量為5μg，電轉(zhuǎn)液體積為250μl镐牺，電壓為250V炫掐， 電容為950μF。
二睬涧、Hela細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染條件是什么募胃？
使用Entranster-E電轉(zhuǎn)液與指數(shù)衰減脈沖電轉(zhuǎn)儀時Hela細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染條件是：
對于0.2 cm電轉(zhuǎn)杯旗唁，細(xì)胞密度為3×10^6 cells/ml，DNA用量為2μg痹束，電轉(zhuǎn)液體積為100μl检疫，電壓為130V， 電容為950μF参袱。
對于0.4 cm電轉(zhuǎn)杯电谣，細(xì)胞密度為3×10^6 cells/ml，DNA用量為5μg抹蚀，電轉(zhuǎn)液體積為250μl剿牺，電壓為260V， 電容為950μF环壤。
三晒来、BHK-21細(xì)胞、Jurkat E6-1細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染條件是什么郑现？
使用Entranster-E電轉(zhuǎn)液與指數(shù)衰減脈沖電轉(zhuǎn)儀時BHK-21或Jurkat E6-1細(xì)胞的電轉(zhuǎn)染條件是：
對于0.2 cm電轉(zhuǎn)杯湃崩，細(xì)胞密度為10×10^6 cells/ml，DNA用量為2μg接箫，電轉(zhuǎn)液體積為100μl攒读，電壓為150V， 電容為950μF辛友。
對于0.4 cm電轉(zhuǎn)杯薄扁，細(xì)胞密度為10×10^6 cells/ml，DNA用量為5μg废累，電轉(zhuǎn)液體積為250μl邓梅，電壓為280V， 電容為950μF邑滨。
四日缨、電穿孔實(shí)驗(yàn)時的細(xì)胞密度是多少？
進(jìn)行電穿孔實(shí)驗(yàn)時.掖看，需確定每種細(xì)胞類型的最佳細(xì)胞密度匣距，以使電穿孔效率最大化。對于Entranster-E電轉(zhuǎn)染試劑來說哎壳，在含電轉(zhuǎn)試劑的終體系中毅待，電穿孔時的細(xì)胞密度一般在1-10×10^6細(xì)胞/ml范圍內(nèi)。對于懸浮細(xì)胞耳峦，最好是接近10×10^6細(xì)胞/ml的高細(xì)胞密度。對于貼壁細(xì)胞焕毫，建議的細(xì)胞密度為1-5×10^6細(xì)胞/ml蹲坷。對于0.2
cm和0.4 cm的電轉(zhuǎn)杯驶乾，每個電轉(zhuǎn)杯的最終電轉(zhuǎn)染液的體積分別為0.1 ml和0.25 ml。
五循签、電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時级乐，對于指數(shù)衰減形式的脈沖條件是什么？
對于Entranster-E電轉(zhuǎn)染試劑县匠，當(dāng)使用0.4cm電轉(zhuǎn)杯時风科，大多數(shù)細(xì)胞類型的指數(shù)衰減脈沖條件在200-300V的電壓范圍和800-1000μF的電容范圍內(nèi)。對于0.2
cm電轉(zhuǎn)杯時乞旦，其范圍分別為80-160 V和800-1000μF贼穆。對于使用0.4 cm電轉(zhuǎn)杯的電穿孔實(shí)驗(yàn)，測試電壓范圍為200–300
V兰粉，電容范圍為800-1000μF故痊。首先，將電壓常數(shù)保持在220 V玖姑，從750μF開始愕秫，以100μF的增量改變電容。隨后焰络，從200
V開始戴甩，以10 V的梯度改變電壓，同時電容恒定闪彼。
六甜孤、電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時，對于方波形式的脈沖條件是什么备蚓？
一般來說课蔬，方波脈沖的理論起始條件可通過指數(shù)衰減參數(shù)來確定，即在保持電容不變的情況下郊尝，將脈沖長度減半二跋，電壓增加約10%。之后的優(yōu)化可在理論計(jì)算的脈沖電壓附近以10
V為梯度增減流昏。如果不知道指數(shù)衰減脈沖條件扎即，可通過測試電壓、電容和脈沖長度范圍找到最佳的方波脈沖條件况凉。當(dāng)使用0.4cm電轉(zhuǎn)杯時谚鄙，大多數(shù)細(xì)胞類型的一般方波脈沖條件都在200-300V的電壓范圍和800-1000μF的電容范圍內(nèi)。對于0.2
cm的電轉(zhuǎn)杯刁绒，其范圍分別為80-160 V和800-1000μF闷营。脈沖長度從10-20毫秒不等。
七、電轉(zhuǎn)染后細(xì)胞孵育時間是多少傻盟？
每種細(xì)胞類型電轉(zhuǎn)染后有最佳孵育時間速蕊。對于質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)染，最佳孵育時間一般為12-48小時娘赴，具體最佳時間需根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康墓嬲堋①|(zhì)粒性質(zhì)和表達(dá)蛋白的半衰期進(jìn)行調(diào)整。
