學(xué)習(xí)小組的最后一天疑苫,舍不得,意猶未盡
測序
今日學(xué)習(xí)了啥
到底啥是測序:測序--核酸DNA分子一級結(jié)構(gòu)的測定纷责。
1.怎么區(qū)分一二三代測序
2.二代測序大體流程
3.NGS組學(xué)都包括哪些分類(粗略)
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1.二代測序原理介紹視頻:https://share.weiyun.com/5qojuBY 密碼:bxsry4
2.文章《測序的世界》:http://www.reibang.com/p/101c14c3a1d2 怎么會有這么詳細清楚的解釋捍掺,咋講的這么通俗易懂呢,優(yōu)秀,感謝小澤
3.如果還是看不懂,那么請:搜狗微信—搜索“測序原理” 舌胶,公眾號一般解釋的比較清楚婴程。
1.測序的世界
第一代DNA測序技術(shù):桑格爾-雙脫氧鏈終止法是最為經(jīng)典的一代測序技術(shù),至今仍是測序行業(yè)的金標準掷贾,目前一代測序在驗證序列(就是平時送公司測序返回來自己blast的那些)以及驗證基因組組裝完整性方面都是金標準。通量低,成本高蚊丐,一代最長能測1000bp,再多了就要重頭開始一遍導(dǎo)致成本高艳吠;另外它一次只測一條麦备,也就是所謂的通量低。準確性高達99.999%昭娩。
第二代DNA測序技術(shù)(next generation sequencing凛篙,NGS)-循環(huán)陣列合成測序法。
主要平臺有:
1.羅氏454公司的GS FLX sequencer
2.Illumina solexa genome analyzer
3.ABI公司的SOLiD sequencer
二代測序大幅度提高了測序速度栏渺,降低了測序成本(下圖)呛梆,保持了高準確性。缺點是讀長短迈嘹,拼接困難削彬,pcr技術(shù)增加了測序的錯誤率。
第三代測序技術(shù)以PacBio公司的SMRT和Oxford Nanopore Technologies 的納米孔單分子測序技術(shù)為標志:不需要經(jīng)過PCR擴增秀仲,超長讀長融痛,可達二代測序的100倍以上,實現(xiàn)了對每一條DNA分子的單獨測序神僵。錯誤率比二代要高雁刷,達到10-15%。
2.組學(xué)
1.基因組學(xué)(核酸序列分析)
(1)全基因組測序(WGS)
(2)全外顯子組測序(WES)
(3)簡化基因組測序(RRGS)
①RAD-Seq
②GBS
③2bRAD
④ddGBS(也就是ddRAD)
作用:
(1)基因組作圖(遺傳圖譜责语、物理圖譜、轉(zhuǎn)錄本圖譜)
(2)核苷酸序列分析
(3)基因定位
(4)基因功能分析
其它:
以全基因組測序為目標的結(jié)構(gòu)基因組學(xué)
以基因功能鑒定為目標的功能基因組學(xué)
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué)(基因表達分析)
(1)mRNA-Seq
(2)IncRNA-Seq(長鏈非編碼RNA)
(3)sRNA-Seq(主要是miRNA-Seq)
作用:
(1)獲得物種或者組織的轉(zhuǎn)錄本信息
(2)得到轉(zhuǎn)錄本上基因的相關(guān)信息目派,如基因結(jié)構(gòu)功能等
(3)發(fā)現(xiàn)新的基因
(4)基因結(jié)構(gòu)優(yōu)化
(5)發(fā)現(xiàn)可變剪切
(6)發(fā)現(xiàn)基因融合
(7)基因表達差異分析
3.蛋白質(zhì)組學(xué)
(1)蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)處理坤候、蛋白及其修飾鑒定
(2)構(gòu)建蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫、相關(guān)軟件的開發(fā)和應(yīng)用
(3)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能預(yù)測 (4)蛋白質(zhì)連鎖圖
4.代謝組
(1)代謝物指紋分析
(2)代謝輪廓分析
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(1)測序技術(shù)原理及常用數(shù)據(jù)格式簡介
(2)DNA 測序技術(shù)的發(fā)展:第三代測序法
(3)測序發(fā)展史:150年的風(fēng)雨歷程
(4) 搜索:【陳巍學(xué)基因】視頻1 (本視頻介紹Illumina測序的化學(xué)原理企蹭,包括:建庫白筹、橋式PCR、邊合成邊測序谅摄、雙端測序徒河、Index序列。)Illumina測序化學(xué)原理