前言
Immugent在之前寫過一篇推文：腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可誘導免疫耐受進而促進遠端轉(zhuǎn)移中网严，解讀了一個關(guān)于腫瘤細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移如何誘導免疫耐受從而促進遠端轉(zhuǎn)移的故事弄兜。這項研究可以說是Immugent看過的設(shè)計最精細、論證最扎實，以及結(jié)果最能反應(yīng)本質(zhì)的文章之一钞速。雖然之前讀過幾遍了，但由于對它的印象極為深刻，因此最近又拿出來讀了兩遍聋溜。
畢竟是發(fā)表在Cell正刊上的文章，其研究內(nèi)容也并不是所有人都能理解的叭爱〈樵辏考慮到此因素，Immugent決定再來深入解剖一下這項研究买雾，并對其中設(shè)計比較精妙的實驗來進行舉例解讀把曼。
不過杨帽，由于小編理解能力也有限，并且做過的實驗也不多嗤军，并不能完全get到作者全部的精髓注盈，還是需要提前給自己搞一個免傷buff。因此有小伙伴覺得理解不對的地方叙赚，可以通過后臺聯(lián)系我們老客，進行溝通交流。
主要內(nèi)容
實驗一：制備淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤細胞系
文章的起點震叮，也是特色之一胧砰，就是通過自體選擇制備出不同亞型的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移瘤細胞克隆型。其實這個實驗操作不難冤荆，但是想法很大膽朴则，而且是通過多次自體篩選出不同代數(shù)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤細胞系。我們知道即使是腫瘤細胞系钓简，但仍是一種程度很高的異質(zhì)體乌妒，里面存在各式各樣的克隆型，具體表現(xiàn)在其能否被免疫系統(tǒng)有效識別外邓，以及能否具有進化出免疫逃逸的潛力撤蚊。前者表現(xiàn)在其是否可以被機體免疫系統(tǒng)快速清除，后者這是和其能否成功進化出免疫耐受相關(guān)损话。在這個體系中侦啸，能被免疫系統(tǒng)快速有效識別的腫瘤細胞克隆型都會被機體很快清除；而正是有一些腫瘤細胞雖然可以被機體免疫系統(tǒng)有效識別丧枪，但是可以迅速進化出免疫逃逸的能力光涂。這類腫瘤細胞就隨后就可以逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，遷移到別處拧烦。
實驗二：使用免疫缺陷鼠研究免疫細胞的角色
在講實驗設(shè)計之前先來普及一下基礎(chǔ)知識：Rag2-/-小鼠體內(nèi)缺少成熟的T/B細胞忘闻，是一種常用的免疫缺陷鼠；而Rag2-/-;Il2rg-/-小鼠體內(nèi)則是除了缺少成熟的T/B細胞外恋博，還缺少NK細胞齐佳，是一種更嚴重的免疫缺陷鼠；最后NOD-scid IL2Rgnull (NSG)小鼠债沮，則是由Prkdc基因及Il2rg基因的敲除突變導致的免疫缺陷型小鼠炼吴，是目前免疫缺陷程度最高的工具小鼠。其小鼠缺乏成熟的T疫衩、B以及NK硅蹦，且不生成免疫球蛋白，樹突狀細胞（Dendritic cells, DC）功能異常，非常適合人源細胞或組織移植提针。
作者為了研究淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移誘導的遠端轉(zhuǎn)移是否和免疫細胞攻擊壓力有關(guān)命爬，而選擇了這多種免疫缺陷鼠。首先是通過對比正常小鼠和免疫缺陷鼠（Rag2-/-;Il2rg-/-）腫瘤生長辐脖，證明了免疫細胞可以發(fā)揮抗腫瘤生長作用饲宛；更進一步的結(jié)果表明，與野生型移植淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤細胞系相比嗜价，NSG小鼠的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤不促進肺轉(zhuǎn)移率艇抠，這表明淋巴細胞對腫瘤細胞的選擇是促使腫瘤遠端轉(zhuǎn)移的主要誘因。
實驗三：研究Treg功能的小鼠模型
為了研究Treg是否也在腫瘤遠處轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用久锥，作者使用了Foxp3DTR小鼠家淤，這種小鼠體內(nèi)特異性缺少Treg細胞。作者在對正常小鼠以及Foxp3DTR小鼠靜脈注射B16-F0-tdTomato細胞瑟由，隨后發(fā)現(xiàn)全系統(tǒng)Treg的缺失可顯著減少肺轉(zhuǎn)移的數(shù)量絮重。隨后為了進一步研究Treg在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮的作用，作者使用了FoxP3EGFP小鼠歹苦，這種小鼠產(chǎn)生的Treg都帶有GFP熒光標記青伤，因此我們可以通過檢測GFP熒光強度來監(jiān)測Treg細胞的功能。
實驗四：區(qū)分來源和研究抗原特異性的小鼠模型
最后來說一下OT-I/OT-II小鼠殴瘦，這兩種小鼠體內(nèi)都只產(chǎn)生OVA（Ovalbumin狠角，卵清蛋白）抗原特異的T細胞，當OVA注射給小鼠會引發(fā)免疫反應(yīng)蚪腋。其中丰歌，OT-1小鼠是體內(nèi)CD8+T特異性識別OVA；OT-11小鼠是體內(nèi)CD4+T特異性識別OVA屉凯。因此立帖，利用這兩種小鼠模型，我們就可以研究抗原特異性的CD8/4T細胞的功能悠砚。這張圖還涉及到另一種標記免疫細胞特異性來源的小鼠模型晓勇，就是CD45.1/45.2小鼠。這兩種小鼠也是免疫學實驗中經(jīng)常使用的小鼠模型哩簿，一般在co-transfer實驗中對不同來源的免疫細胞進行標記，
展望
不知道大家有沒有和小編同樣的感受酝静，就是會打心底覺得遇到一篇好文章是很幸運的一件事节榜。當讀到一篇比較有學習價值的文章后，小編會覺得比吃一頓大餐還要開心别智；而且往往這類文章需要重復(fù)閱讀宗苍，因為每次閱讀后的感受不一樣，收獲到的知識也不一樣。
對于這項研究來說讳窟，雖然得到的很多結(jié)果都是目前公認的让歼，或者感受到的，但是其中的大多數(shù)都缺少堅實的實驗數(shù)據(jù)來證實丽啡。而這項研究的作者不僅對每一個發(fā)現(xiàn)都進行足夠的驗證谋右，而且還很巧妙的將它們串到一起，特別是對每一種免疫細胞在腫瘤微環(huán)境承擔的角色都解釋的非常到位补箍。在遇到不同的生物學問題改执，作者都能做到使用最直接，最有力的實驗進行論證坑雅，Immugent是覺得很受啟發(fā)辈挂。
好啦，本次分享到這就結(jié)束了啦裹粤，歡迎大家批評指正~~
[參考文獻]
Reticker-Flynn NE, Zhang W, Belk JA, Basto PA, Escalante NK, Pilarowski GOW, Bejnood A, Martins MM, Kenkel JA, Linde IL, Bagchi S, Yuan R, Chang S, Spitzer MH, Carmi Y, Cheng J, Tolentino LL, Choi O, Wu N, Kong CS, Gentles AJ, Sunwoo JB, Satpathy AT, Plevritis SK, Engleman EG. Lymph node colonization induces tumor-immune tolerance to promote distant metastasis. Cell. 2022 May 26;185(11):1924-1942.e23. doi: 10.1016/j.cell.2022.04.019. Epub 2022 May 6. PMID: 35525247; PMCID: PMC9149144.
