? 制備跑膠的系列步驟

?一饺律、常用培養(yǎng)基

?1、LB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g ，酵母提取物5g 铸磅，氯化鈉10g 如果需要用1NNaOH(～1ml)調(diào)整pH至7.0缀遍，再補(bǔ)足水至1L慕匠。 注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

?2域醇、SOB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g台谊，酵母提取物5g蓉媳，氯化鈉0.5g，1mol/L氯化鉀2.5ml 用水 補(bǔ)足體積到1L锅铅。分成100ml的小份酪呻，高壓滅菌。 培養(yǎng)基冷卻到室溫后盐须，再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂玩荠。

?3、SOC培養(yǎng)基 成分贼邓、方法同SOB培養(yǎng)基的配制阶冈，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅 過菌的1mol/L氯化鎂外塑径，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足夠水中女坑，再用水補(bǔ)足到 100ml，用0.22um的濾膜過濾除菌)统舀。

?4堂飞、TB培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨12g 酵母提取物24g 甘油4ml 各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃绑咱，再加100ml滅菌的170mmol/LKH2PO4 /0.72mol/LK2HPO4 的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中绰筛，使終體積為100ml。高壓滅菌或用 0.22um的濾膜過濾除菌)描融。

5铝噩、2×YT培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨16g ，酵母提取物10g 窿克，氯化鈉4ml 如果需要用1NNaOH(～1ml)調(diào)整pH至7.0骏庸，再補(bǔ)足水至1L。 注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L年叮。

6具被、YPD培養(yǎng)基 將下列組分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g， 酵母提取物10g 只损，葡萄糖20g 用水補(bǔ)足體積為1L后一姿，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前跃惫，對(duì)色氨酸營養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加 1.6g色氨酸叮叹，因?yàn)閅PD培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板爆存，需要在高壓滅菌前加入20g 瓊脂粉蛉顽。

?二、常用抗生素 氨芐青霉素(ampicillin)(100mg/ml)?氨芐青霉素(ampicillin)(100mg/ml) 溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中先较，最后定容至10ml携冤。分裝成小1悼粮，份于-20℃貯存。 常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基曾棕。

1扣猫，羧芐青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml睁蕾。分裝成小份于-20℃貯存。常以 25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基债朵。

2子眶，?甲氧西林(methicillin)(100mg/ml) 溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至10ml序芦。分裝成小份于-20℃貯存臭杰。常以37.5ug/ml終 濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長培養(yǎng)基。

3谚中，?卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml) 溶解0.1g卡那霉素于足量的水中渴杆，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存宪塔。常以 10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基磁奖。

4，氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml) 溶解0.25g氯霉素足量的無水乙醇中某筐，最后定容至10ml比搭。分裝成小份于-20℃貯存。常以 12.5ug/ml～25ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基南誊。

5身诺，?鏈霉素(streptomycin)(50mg/ml) 溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中，最后定容至10ml抄囚。分裝成小份于-20℃貯存霉赡。常以 10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。

6幔托，?萘啶酮酸(nalidixicacid)(5mg/ml) 溶解0.05g萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中穴亏，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存重挑。常以15ug/ml 的終濃度添加于生長培養(yǎng)基迫肖。

7，?四環(huán)素(tetracyyline)(10mg/ml) 溶解0.1g四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中攒驰，或者將無堿的四環(huán)素溶于無水乙醇蟆湖，定容至10ml。分裝成 小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光玻粪，于-20℃貯存隅津。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長 培養(yǎng)基诬垂。

小技巧：如配制10mg/ml卡那霉素，先在鹽水瓶或血清瓶加入10ml雙蒸水伦仍，高壓结窘，冷卻后加入0.1g 卡那霉素，混勻充蓝，濾膜過濾到試管中隧枫，再以1ml/管分裝到EP管中待用。

?制備跑膠的系列步驟 ?

?配制TBE buffer： 倒入100ml TBE 進(jìn)入1.9L 純凈水中谓苟，搖勻即可官脓。這個(gè)需要倒 進(jìn)跑膠臺(tái)子里面，同時(shí)用于下面涝焙。

? 配制1% Agr 膠：

?1. 稱重2g Agr粉放入200ml TBE中

?2. 微波爐2分鐘卑笨，融化充分放在溫水中浴，標(biāo)記上姓名和日期

?3. 需要用的時(shí)候在拿出來仑撞，否則會(huì)凝固赤兴。（大概可以用5次） ?

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?制作玻璃跑膠平板

?1. 在小燒杯里放入3 μL Red Safe dye（冰箱里錫紙包） + 10 mL 1% Agr gel 2. 放好夾子一定要平行，Loading在玻璃片上隧哮，平穩(wěn)20分鐘桶良。

?跑膠：

?1. 注進(jìn)6μL marker 在第一個(gè)軌道，

?2. 接下來6μL sample 在依次其他軌道沮翔，比例是： 3. 1 μL loading dye + 5 μL plasmids/ DNA production 4. 120V for 30 分鐘艺普。 ?

?讀結(jié)果： 1. 四樓電腦室 用戶名密碼進(jìn)入機(jī)器 2. 打開機(jī)器2個(gè)門，一定帶手套 3. 把膠從玻璃片上移下來鉴竭，放在中間 4. 鼠標(biāo)選擇：Quantity one- basic- select scammer- 5. 機(jī)器上選擇EPI-WHITE —TRANS UV 6. Auto expose歧譬，Up/down， 7. Save -expose USB搏存， 8. 下載image J瑰步，google下載Mac 9. Colour balance 去調(diào)整顏色，分析結(jié)果 10. DNA log DNA ladder