Cytori細(xì)胞療法?有效治療中重度燒傷引起的瘢痕
導(dǎo)讀：Cytori Therapeutics公司(納斯達(dá)克代碼:CYTX)宣布BARDA（美國(guó)生物醫(yī)學(xué)高級(jí)研究和發(fā)展管理局）資助的使用Cytori細(xì)胞療法?治療纖維化瘢痕形成模型的臨床前研究數(shù)據(jù)正式發(fā)表在《Stem Cell Research and Therapy》雜志上，IF=4.211。這項(xiàng)研究是在BARDA的支持下進(jìn)行的闹获，作為美國(guó)FDA批準(zhǔn)的RELIEF試驗(yàn)的臨床前研究數(shù)據(jù)的組成部分[1]杉允。
該研究描述了Cytori細(xì)胞療法?的活性成分脂肪來源的再生細(xì)胞（ADRCs）,被注入到增生性疤痕的臨床前研究的金標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物--豬的深部部分創(chuàng)面模型该默。治療6個(gè)月后般贼，用ADRCs治療的傷口與對(duì)照組的傷口相比瘸恼，增生性瘢痕的指標(biāo)顯著減少梧躺。改善的指標(biāo)包括皮膚硬度似谁、組織、血管分布和表皮變化掠哥。結(jié)果分析表明白細(xì)胞介素IL-6表達(dá)水平在受傷后2周上調(diào)巩踏，而在治療4周顯著降低，這說明IL-6作為炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)器续搀，起到潛在的作用塞琼。
試驗(yàn)過程和結(jié)果
1. ADRCs的分離和鑒定
使用
Celution系統(tǒng)
從豬的腹股溝脂肪組織中自動(dòng)分離脂肪來源的再生細(xì)胞（ADRCs）。Celution系統(tǒng)
從每克脂肪組織中分離出的ADRCs細(xì)胞平均數(shù)量為1.65×106±0.4×106個(gè) (范圍: 1.2×106-2.2×106個(gè)細(xì)胞/每克脂肪組織)禁舷；平均細(xì)胞活性為97.2%±0.4%（從96.7%到97.6%不等）彪杉。流式細(xì)胞檢測(cè)分析ADRCs的細(xì)胞組成（圖1）：（1）白細(xì)胞(CD45+)平均占比為9.8%；
（2）內(nèi)皮細(xì)胞(CD31 +/CD45-)的平均占比為5.7%牵咙；
（3）基質(zhì)細(xì)胞CD90+/CD45-：成纖維細(xì)胞和成纖維樣細(xì)胞) 平均占比68.9%派近；（4）平滑肌相關(guān)細(xì)胞(壁細(xì)胞;CD31-/CD146+/CD45-)占26.1%左右；
（5）CFU-F分析表明基質(zhì)血管祖細(xì)胞/干細(xì)胞平均占比為4.8%（圖2）洁桌；
圖1：流式細(xì)胞檢測(cè)分析ADRCs組分
圖2：成纖維細(xì)胞樣集落形成單位測(cè)定(CFU-F)ADRCs中的基質(zhì)祖細(xì)胞/干細(xì)胞
2. ADRCs移植減少了疤痕組織的硬度
使用2種非侵入性設(shè)備（硬度計(jì)和纖維分析計(jì)）對(duì)ADRCs移植后每個(gè)傷口的皮膚硬度2月和6月的結(jié)果進(jìn)行分析渴丸。硬度計(jì)的檢測(cè)數(shù)據(jù)表明：ADRCs治療組的傷口皮膚硬度減少了10~20%（圖3a）：
?(1) 2個(gè)月結(jié)果: ADRCs治療組：對(duì)照組=33±2.3和42.5±1.9，p < 0.05另凌；
?(2) 6個(gè)月結(jié)果: ADRCs治療組：對(duì)照組=33.2±2.6和38.3±2.6谱轨，p < 0.05；
?
纖維計(jì)檢測(cè)結(jié)果顯示了同樣的規(guī)律（圖3b）：
(1) 2個(gè)月結(jié)果：ADRCs治療組：對(duì)照組=0.34±0.04：0.47±0.04 N, p < 0.05;
(2) 6個(gè)月結(jié)果：ADRCs治療組：對(duì)照組=0.54±0.03 vs 0.6±0.04 N, p = 0.08吠谢。
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圖3 a）硬度計(jì)測(cè)量ADRCs治療2月和6月的組織硬度土童；
? ? ? ?b）纖維計(jì)測(cè)量ADRCs治療2月和6月的組織硬度；
3. ADRC移植促進(jìn)了表皮重構(gòu)
表皮突減少引起了表皮的平整[2囊卜，3]娜扇，在固定表皮到健康皮膚真皮起到了關(guān)鍵作用，這是增生性瘢痕的一個(gè)特點(diǎn)栅组；定量分析治療組和對(duì)照組的表皮突的頻率雀瓢，ADRCs治療組比對(duì)照組平均大48%（圖4a，4b）：
ADRCs治療組：對(duì)照組=5.2±1.4：3.5±1.4（mm）玉掸，p<0.01刃麸；
4. ADRC移植改善了膠原沉積
?
膠原定位和膠原束形態(tài)異常是增生性瘢痕的標(biāo)志[3，4]司浪。最常規(guī)的膠原蛋白結(jié)構(gòu)分析標(biāo)準(zhǔn)是膠原蛋白的方向和厚度泊业。在人體的增生性瘢痕（hyperplastic scar, HTS）中把沼，膠原蛋白是與表皮平行的密集排列的離散薄纖維束。為了研究ADRCs在膠原組織形成中的作用吁伺，我們對(duì)損傷部位治療6月進(jìn)行活體的組織化學(xué)染色饮睬。對(duì)照組的損傷部位的膠原纖維密集排列且平行于表皮方向。ADRCs治療組的損傷部位顯示出更厚的厚度和束間距（圖4c）篮奄。
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圖4 ADRCs在膠原蛋白組織和表皮成熟過程中的作用捆愁；
? ? ?a）Masson三色染色法對(duì)損傷組織接受ADRCs治療后6月進(jìn)行活檢，CtrlLR為對(duì)照組窟却，ADRCs為治療組昼丑；
? ? ?b）ADRCs治療組和對(duì)照組損傷部位的表皮突數(shù)量；
? ? ?c）對(duì)損傷部位進(jìn)行H&E染色處理后夸赫，ADRCs治療組和對(duì)照組的膠原蛋白組織菩帝。
5. ADRCs移植降低了瘢痕組織的血管化形成
?
增生性瘢痕往往伴隨著血管數(shù)量的增多[5]。為了評(píng)估ADRCs在瘢痕組織微血管密度的作用茬腿，對(duì)治療后6個(gè)月的損傷部位進(jìn)行組織切片免疫化學(xué)活檢分析呼奢，使用一個(gè)公認(rèn)的血管壁平滑肌組織標(biāo)記α-SMA。數(shù)字定量結(jié)果顯示顯示ADRC治療組的微血管密度(MVD)比對(duì)照組低了27%：
ADRCs治療組：對(duì)照組=17.6±4.7：24.4±6mm2切平，p< 0.05 (圖5)控妻；
圖5 ?ADRCs對(duì)瘢痕血管化的作用
a）對(duì)照組和治療組傷口部位治療6個(gè)月后的活檢組織α-SMA的染色分析；
b）自動(dòng)化量化分析對(duì)照組和治療組損傷部位的微血管密度揭绑；
6. ADRCs移植增加了彈性纖維的長(zhǎng)度
彈性纖維是皮膚的重要的組成部分，在增生性瘢痕組織中往往非常少[6]郎哭。為了研究ADRCs對(duì)彈性纖維再生的作用他匪，收集治療后的6個(gè)月時(shí)的標(biāo)本進(jìn)行VVG染色。與對(duì)照組相比夸研，ADRC治療組的平均彈性纖維長(zhǎng)度顯著增加 (約23%邦蜜，圖6)：
ADRCs治療組：對(duì)照組=43.9±5.4：35.5±5.8 μm，p < 0.05亥至。
圖5 ADRCs對(duì)彈性纖維長(zhǎng)度的影響
a）治療6月后悼沈，對(duì)照組和治療組的活體組織VVG染色分析；
b）Aperio Image Scope分析對(duì)照組和ADRCs治療組彈性纖維的長(zhǎng)度姐扮；
7. ADRCs移植調(diào)控炎癥反應(yīng)
增生性瘢痕形成過程伴隨著炎癥反應(yīng)的解除和破壞[7絮供，8]。為了進(jìn)一步研究ADRCs在損傷愈合和HTS形成中的炎癥反應(yīng)過程茶敏。我們研究了損傷愈合階段（受傷后2周）和增生性瘢痕早起形成階段（受傷后2月）的IL-6壤靶，TNF-α和IL-10的細(xì)胞因子的數(shù)量水平。
治療后2周惊搏，ADRCs治療組的傷口表現(xiàn)出更高的IL-6(是對(duì)照組的2.7倍贮乳，p < 0.05)和TNF-α(1.5倍;p = 0.06)表達(dá)水平忧换；治療后2月，ADRCs治療組的細(xì)胞因子IL-6水平比治療組更低 (4.5倍; p = 0.06)向拆，TNF-α水平在ADRCs治療組和對(duì)照組的傷口之間沒有顯著差異 (圖7)亚茬。在ADRCs治療組和對(duì)照組均未檢測(cè)到IL-10的表達(dá)。
圖7 ?ADRCs對(duì)傷口及早期瘢痕驗(yàn)證反應(yīng)的影作用浓恳。治療2周后刹缝，ADRCs治療組和對(duì)照組TNF-α和IL- 6水平；使用豬特異性蛋白酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒提取和溶解IL-6和TNF-α蛋白奖蔓。
8. 試驗(yàn)總結(jié)
ADRCs治療組損傷部位表皮突的頻率顯著增加赞草。表皮突在將表皮固定在真皮上起到關(guān)鍵作用，幫助表皮免受剪切力引起的損傷吆鹤。
ADRCs治療組的損傷部位表現(xiàn)出更正常的血管性厨疙，更正常排列的膠原蛋白束，更長(zhǎng)的彈性纖維疑务。
ADRCs移植在促進(jìn)損傷愈合時(shí)調(diào)控了許多個(gè)增生性瘢痕的表征沾凄。
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本研究拓寬了我們之前的工作且表明ADRC的治療不僅僅是簡(jiǎn)單的改進(jìn)了上皮化過程，而且可以的長(zhǎng)期改善瘢痕和皮膚功能知允。
研究?jī)r(jià)值
本臨床前研究結(jié)果被納入到BARDA贊助的基于Cytori細(xì)胞療法?的RELIEF臨床試驗(yàn)撒蟀。RELIEF試驗(yàn)將評(píng)估Cytori細(xì)胞療法治療人體的大量熱燒傷損傷的情況。除了對(duì)早期治療的評(píng)估外温鸽，通過類似于本研究中應(yīng)用的方法保屯，RELIEF試驗(yàn)將評(píng)估幾個(gè)與瘢痕相關(guān)的指標(biāo)參數(shù)。
“纖維化是燒傷和硬皮病的常見表現(xiàn)“。Cytori首席科學(xué)家約翰·弗雷澤博士說【难郏“這一臨床前研究與許多新興研究一致，表明Cytori的ADRC技術(shù)在纖維化疾病中的有益作用切蟋。”
熱燒傷的治療仍然是一個(gè)關(guān)鍵的未滿足的醫(yī)療需求榆芦。盡管護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)主要包括敷料柄粹、皮膚移植和皮膚替代品，但患者經(jīng)常遭受疼痛匆绣、瘢痕驻右、皮膚攣縮和受限制的運(yùn)動(dòng)范圍。增生性瘢痕的特點(diǎn)是生長(zhǎng)崎淳、變色旺入、瘙癢和疼痛，這是深厚度燒傷引起的常見的纖維化結(jié)果。
由Cytori提供的自體細(xì)胞療法在提高創(chuàng)面愈合的質(zhì)量茵瘾、康復(fù)速度和減少疤痕方面具有潛力礼华。在大規(guī)模的傷亡事件中，美國(guó)政府問責(zé)辦公室預(yù)測(cè)多達(dá)1萬名患者可能需要熱燒傷護(hù)理拗秘。
在美國(guó)圣絮，僅僅有限數(shù)量的專科醫(yī)生和燒傷中心為燒傷創(chuàng)面提供了公共衛(wèi)生需求雕旨，而Cytori細(xì)胞療法可以迅速并廣泛應(yīng)用于此類事件后由非尠缃常科醫(yī)療人員進(jìn)行廣泛應(yīng)用。
因此凡涩，Cytori的自體細(xì)胞治療是一種新的醫(yī)學(xué)技術(shù)手段棒搜，不僅能促進(jìn)創(chuàng)面愈合和組織修復(fù)，改善傷者護(hù)理活箕；同時(shí)力麸，也可以應(yīng)用于解決大規(guī)模傷亡事件中遇到的挑戰(zhàn)，
關(guān)于RELIEF試驗(yàn)
RELIEF試驗(yàn)將評(píng)估經(jīng)靜脈注射的Cytori細(xì)胞療法?作為常規(guī)治療的輔助方法育韩，在治療那些熱燒傷覆蓋身體表面積的20%和50%之間的患者安全性和可行性克蚂。
受試者將至少有一個(gè)深度部分或全部的厚度燒傷創(chuàng)面，以配合自體裂開厚度皮膚移植(STSG)筋讨。受試者將隨機(jī)(1:2)接受通常的護(hù)理埃叭，或通常的護(hù)理補(bǔ)充Cytori細(xì)胞治療。
在主要評(píng)估安全性和可行性的同時(shí)悉罕，RELIE試驗(yàn)還將評(píng)估一系列與皮膚移植愈合相關(guān)的參數(shù)赤屋。這項(xiàng)試驗(yàn)被批準(zhǔn)在美國(guó)境內(nèi)的10個(gè)臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)共計(jì)入組30名患者，預(yù)計(jì)該研究將于近期啟動(dòng)壁袄。
關(guān)于Cytori
Cytori是一家聚焦于再生醫(yī)學(xué)和腫瘤療法研發(fā)的治療學(xué)公司益缎，基于其專有的細(xì)胞療法和納米粒子平臺(tái)開發(fā)再生和腫瘤療法，以用于解決不同的醫(yī)療需求然想。
臨床前研究和臨床試驗(yàn)的數(shù)據(jù)表明,Cytori細(xì)胞療法?機(jī)理主要是通過改善血液循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng),促進(jìn)傷口修復(fù)來實(shí)現(xiàn)的欣范。因此,Cytori細(xì)胞療法?能夠?yàn)椴煌N類的疾病的提供治療選擇,可以提供給醫(yī)生和病人在現(xiàn)階段通過Cytori公司的專有技術(shù)和產(chǎn)品变泄。
關(guān)于絡(luò)仁醫(yī)療
絡(luò)仁醫(yī)療創(chuàng)立于2013年，公司致力于打造再生醫(yī)學(xué)旗艦平臺(tái)恼琼，總部設(shè)于新加坡妨蛹，在中國(guó)大陸、香港晴竞、澳大利亞和馬來西亞設(shè)有子公司蛙卤。絡(luò)仁醫(yī)療與國(guó)際領(lǐng)先的再生醫(yī)學(xué)醫(yī)療機(jī)構(gòu)及研究所建立戰(zhàn)略合作關(guān)系，公司聚焦于推動(dòng)再生醫(yī)學(xué)治療技術(shù)在慢性疾病、血管類疾病颤难、免疫系統(tǒng)疾病及部分罕見疾病的臨床治療和應(yīng)用神年，從而提高醫(yī)生應(yīng)對(duì)上述病癥的方法和手段，改善病患生存品質(zhì)行嗤，為全人類的健康和幸福而努力已日。如您想了解更多信息，請(qǐng)?jiān)L問www.loremvascular.cn.
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