ChIP建議

[if !supportLists]1.?[endif]總是保證細(xì)胞和組織在冰上進(jìn)行,細(xì)胞裂解需要在冰上進(jìn)行剩燥,所要加入的試劑和樣本都要保持4度的狀態(tài)。

[if !supportLists]2.?[endif]交聯(lián)的時(shí)間和甲醛的濃度需要特別注意立倍,如果使用多聚甲醛灭红,建議使用新配的。保證甲醛或者多聚甲醛的濃度在1%左右口注。

[if !supportLists]3.?[endif]交聯(lián)可以防止DNA和蛋白質(zhì)復(fù)合物的分離变擒,致使最后得到的信號(hào)較弱。

[if !supportLists]4.?[endif]過(guò)交聯(lián)可能導(dǎo)致一些非特異性的蛋白和DNA結(jié)合疆导,導(dǎo)致背景噪音增加赁项。

[if !supportLists]5.?[endif]在超聲的過(guò)程中避免液體中出現(xiàn)大塊的組織葛躏,建議有過(guò)濾的操作澈段。

[if !supportLists]6.?[endif]超聲的管子需要薄一點(diǎn)悠菜,超聲的溫度需要低溫,每次超聲時(shí)間不能太長(zhǎng)败富,堅(jiān)持多超幾次悔醋,每次超聲循環(huán)數(shù)較少。

[if !supportLists]7.?[endif]超聲之后的片段大小不要少于500bp兽叮。當(dāng)然不同的細(xì)胞類型有不同的超聲片段大小芬骄。

[if !supportLists]8.?[endif]磁珠不能干,需要4℃保存鹦聪。在吸取之前需要混勻磁珠账阻。

[if !supportLists]9.?[endif]抗體太少,沒(méi)有IP足夠的量泽本,抗體太多淘太,噪音太高。過(guò)夜孵化可以增加特異性和信號(hào)规丽。

[if !supportLists]10.?[endif]解交聯(lián)蒲牧,95℃,15min(需要保護(hù)的赌莺,好像是高鹽)冰抢,或者加入蛋白酶K65℃過(guò)夜或者4個(gè)小時(shí)。

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