承接上一篇：采用生物信息學(xué)方法篩選和分析白癜風(fēng)差異表達(dá)基因【2】
2．皮膚組織樣本收集：
2019年1 - 6月于新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院收集8例漢族尋常型白癜風(fēng)患者皮損及非皮損皮膚組織標(biāo)本乳怎，男1例沧卢，女7例狡逢，年齡10 ~ 25（15.25 ± 5.12）歲壤躲，發(fā)病年齡9 ~ 18（13.13 ± 2.85）歲刷后。4例為進(jìn)展期（皮損正在進(jìn)展或6個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)新皮損）撕彤，4例為穩(wěn)定期（6個(gè)月內(nèi)皮損大小/數(shù)量未增加）须肆。4例皮損組織取自小腿虫溜，3例取自前臂游桩，1例來自頸部牲迫；8例非皮損組織均取自臀部。所有患者在納入本研究前3個(gè)月以上未接受任何全身或局部治療借卧。本研究經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批編號(hào)：LCEC[2016]001）盹憎，所有患者均簽署了知情同意書。
3．實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證DEG mRNA的表達(dá)：
使用RNAiso-Plus試劑盒[寶生物工程（大連）有限公司]提取8例白癜風(fēng)患者皮損及非皮損組織中的總RNA铐刘。采用cDNA合成試劑盒[寶生物工程（大連）有限公司]將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA陪每。以1 μg cDNA為底物，應(yīng)用SYBR Green試劑（美國ThermoFisher Scientific公司）镰吵，在ABI 7300 Real-Time PCR系統(tǒng)（美國Applied Biosystems公司）上行實(shí)時(shí)定量PCR檢測檩禾，引物序列見表1。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參捡遍，用2-??Ct方法計(jì)算DEG mRNA的相對表達(dá)量锌订，其中?Ct=目的基因Ct值-內(nèi)參Ct值，??Ct=白癜風(fēng)組?Ct值-對照組?Ct值画株。
表1
實(shí)時(shí)定量PCR中引物序列
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