游離RNA(cell-free RNA懈糯，cfRNA)是指存在于體液中細(xì)胞外的內(nèi)源性或外源性RNA奢方，包括mRNA、lncRNA和miRNA等渣触。其中血漿游離mRNA羡棵、lncRNA由于攜帶豐富的信息，逐漸成為液體活檢的重要組成部分嗅钻。想要高效又高質(zhì)量的提取出血漿游離RNA，我們要搞清楚血液來源樣本的類型有哪些，血漿游離RNA提取方法如何選擇剩膘，試劑盒的選擇標(biāo)準(zhǔn)是怎樣的喉悴？
一、什么是外周血宝磨，什么是全血，什么是血清，什么是血漿概说？
新鮮的血液（也叫全血，醫(yī)學(xué)上稱為外周血）加入抗凝劑（如檸檬酸鈉嚣伐，EDTA等糖赔，一般醫(yī)院采血都是用抗凝管采集），靜置一段時(shí)間轩端，會(huì)出現(xiàn)分層的現(xiàn)象放典。上面淡黃色的半透明液體是血漿，約占55%基茵，下面暗紅色不透明的是紅細(xì)胞奋构，約占45%。中間薄薄的一層白色物質(zhì)是白細(xì)胞和血小板拱层，不到1%声怔。紅細(xì)胞、白細(xì)胞舱呻、血小板共同組成了血細(xì)胞醋火。
特別提示：不加抗凝劑的血液很快就會(huì)凝成血塊，在凝血塊周圍出現(xiàn)的淡黃色的透明液體是血清箱吕，血清中不含纖維蛋白原芥驳。
簡(jiǎn)單來說，全血包括血漿和血細(xì)胞（紅細(xì)胞茬高、白細(xì)胞兆旬、血小板），血漿包括血清和纖維蛋白原怎栽。
二丽猬、血漿游離RNA含量過少，選擇何種方法提妊椤脚祟？
常用的血漿游離RNA提取方法主要有酚-氯仿法、硅膠磁珠吸附法(磁珠法)以及硅膠膜吸附柱法(柱式法)强饮，其中酚-氯仿法由于其毒性大由桌、提取效率低、重復(fù)差等特點(diǎn)并不適宜用于血漿游離RNA提取。目前主要用于血漿游離RNA提取的方法以磁珠法和柱式法為主行您。由于提取原理上的缺陷铭乾，磁珠法的提取富集度和靈敏度遠(yuǎn)不如離心柱法，而即使是離心柱法娃循，目前也存在富集倍數(shù)偏低的問題炕檩。但要獲得大量高濃度的游離RNA，柱式法是目前唯一的選擇捌斧。一些生物公司如Qiagen捧书、Takara、Biog等都研發(fā)出了比較不錯(cuò)的血漿游離RNA提取產(chǎn)品骤星。
三、血漿游離RNA試劑盒的選擇標(biāo)準(zhǔn)爆哑？
1) 較高的提取得率
在實(shí)驗(yàn)試劑的選擇中洞难，如果選擇不謹(jǐn)慎，很有可能導(dǎo)致提取的RNA濃度過低將無法進(jìn)一步分析揭朝，如基因克隆队贱、基因檢測(cè)、微生物核酸檢測(cè)潭袱、測(cè)序柱嫌、分子雜交等，所以選擇正確的試劑非常關(guān)鍵屯换，可以直接提高實(shí)驗(yàn)的成功率编丘。Qiagen、Takara彤悔、Biog等公司都具有較為先進(jìn)的技術(shù)嘉抓，可使血漿游離RNA獲得較高的提取得率。其中晕窑，國(guó)內(nèi)Biog所研發(fā)的血清血漿游離RNA提取試劑盒（中提）可高效富集提取液體樣本中的低豐度游離RNA抑片，較普通試劑盒的提取濃度大幅提升3倍以上，有效克服了一般試劑盒樣本量大杨赤、洗脫液多敞斋、RNA 提取終濃度依然較低的缺點(diǎn)，可廣泛用于Northern雜交疾牲、RT-PCR植捎、Real Time RT-PCR、cDNA 文庫構(gòu)建阳柔、測(cè)序等各種常規(guī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)鸥跟。
2)提取的RNA純度高
核酸純度一般根據(jù)A260/A280比值來判斷。A260/A280是指DNA或RNA在260nm處的吸光值與在260nm處的吸光值的比值，用來表示DNA或RNA的純度的医咨。純RNA的A260/A280=2.0枫匾。當(dāng)樣品被蛋白質(zhì)或者酚污染的話，A260/A280值會(huì)下降拟淮。RNA樣品被DNA污染的話干茉，A260/A280值會(huì)下降。
使用Q公司血漿RNA提取試劑盒提取的血漿RNA很泊，A260/A280一般在1.8-1.9之間角虫；使用BIOG血清血漿游離RNA提取試劑盒（中提）提取的血漿RNA，A260/A280一般在1.8-2.0之間委造，使用T公司血漿RNA提取試劑盒提取的血漿RNA戳鹅，A260/A280比值在1.7-1.9之間。Q公司提取RNA的純度似乎優(yōu)于國(guó)產(chǎn)試劑昏兆，但我們提取的RNA是用于PCR檢測(cè)枫虏，結(jié)果并無明顯影響∨朗可能因?yàn)锽iog公司血清血漿游離RNA提取試劑盒（中提）提取的血漿RNA得率較高的原因隶债，同樣的RNA加樣體積（2uL），Biog試劑盒提取的RNA熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果CT值要優(yōu)于Q公司試劑盒提取的RNA跑筝。
3) 操作簡(jiǎn)便性
就我們?cè)?jīng)用過的以上三種提取試劑盒來說死讹，Q公司的血漿RNA提取試劑盒提取過程大約35min，從樣本處理開始需要個(gè)13步驟曲梗；T公司血清/血漿游離RNA提取試劑盒整個(gè)提取過程需要約50min赞警，從樣本開始處理11個(gè)步驟；Biog公司的血清血漿游離RNA提取試劑盒（中提）提取過程大約25min虏两，從樣本開始處理10個(gè)步驟仅颇。可見Biog公司的血漿游離RNA提取試劑盒（中提）在操作簡(jiǎn)便性上具有一定優(yōu)勢(shì)碘举，更適合于較多樣本的檢測(cè)忘瓦。據(jù)了解，該產(chǎn)品已通過藥監(jiān)局備案引颈，也更適合臨床樣本的檢測(cè)耕皮。
