酶聯(lián)免疫吸附劑檢測(cè) ELISA
原理：利用抗體能夠?qū)?yīng)的抗原蛋白分子特異性結(jié)合棒卷，同時(shí)通過抗體上的酶連標(biāo)記與底物反應(yīng)顯色或被激發(fā)而發(fā)光，最終間接完成抗原抗體復(fù)合物的定量檢測(cè)分析魔招。總結(jié)起來就是①抗原抗體特異性結(jié)合形成復(fù)合物，②抗體抗體復(fù)合物的標(biāo)記恋谭。
三個(gè)步驟：① 待測(cè)蛋白被捕獲或固定在微孔板上；② 用目標(biāo)特異性檢測(cè)蛋白檢測(cè)分析物挽鞠；③ 酶反應(yīng)疚颊，即共軛酶將其底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物。根據(jù)不同的捕獲和檢測(cè)方法可分為四種類型：直接法信认、間接法材义、夾心法，競(jìng)爭(zhēng)法嫁赏。
1其掂、直接法：首先將待測(cè)抗原固定在微孔板孔內(nèi)，然后加入酶標(biāo)的一抗與抗原結(jié)合潦蝇，最后加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng)并檢測(cè)吸光度款熬，由于吸光度的大小和抗原抗體復(fù)合物的數(shù)量成線性關(guān)系，故可根據(jù)所測(cè)吸光度的值計(jì)算抗原的含量攘乒。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單贤牛，不存在抗原與二抗存在交叉反應(yīng)的錯(cuò)誤結(jié)果。缺點(diǎn)：抗體制備難则酝，檢測(cè)信號(hào)無法放大殉簸。
2、間接法：和直接法的區(qū)別在于用兩種抗體代替一種抗體。待測(cè)抗原固定在微孔板內(nèi)喂链，結(jié)合抗原的抗體不帶酶標(biāo)記物返十，當(dāng)抗原抗體結(jié)合后，加入帶酶標(biāo)的二抗和一抗結(jié)合椭微，加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng)洞坑。優(yōu)點(diǎn)：二抗制備簡(jiǎn)單，選擇面廣蝇率，酶標(biāo)種類多迟杂；一抗無需結(jié)合酶標(biāo)保證了免疫結(jié)合活性；檢測(cè)靈敏度高本慕。缺點(diǎn)：存在潛在的二抗與抗原結(jié)合的風(fēng)險(xiǎn)排拷，造成信號(hào)錯(cuò)亂；操作步驟多锅尘，反應(yīng)時(shí)間久监氢。
3、夾心法：在間接法的基礎(chǔ)上改進(jìn)藤违，在微孔板的下方預(yù)先包被一種捕獲抗體用于結(jié)合抗原浪腐，在此復(fù)合物基礎(chǔ)上再與一抗結(jié)合，然后與二抗結(jié)合并檢測(cè)顿乒。優(yōu)點(diǎn)：二抗制備簡(jiǎn)單议街，選擇面廣，酶標(biāo)種類多璧榄；一抗無需結(jié)合酶標(biāo)保證了免疫結(jié)合活性特漩；檢測(cè)靈敏度高。缺點(diǎn)：存在潛在的二抗與抗原結(jié)合的風(fēng)險(xiǎn)骨杂，造成信號(hào)錯(cuò)亂涂身；操作步驟多，反應(yīng)時(shí)間久搓蚪。
4访得、競(jìng)爭(zhēng)法：若待測(cè)抗原很小，無法同時(shí)結(jié)合捕獲抗體和一抗的話就不適合用夾心法檢測(cè)陕凹。此時(shí)可以在微孔板板內(nèi)包被抗體悍抑，同時(shí)提供帶標(biāo)記的同種抗原，把待測(cè)抗原和標(biāo)記抗原同時(shí)加入和抗體結(jié)合杜耙，兩種抗原會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性和抗體結(jié)合搜骡，當(dāng)檢測(cè)到信號(hào)較高時(shí)，表明待測(cè)抗原含量越少佑女。
ELISA與Western Blot的比較：WB測(cè)定胞內(nèi)蛋白需要裂解細(xì)胞提取蛋白记靡，ELISA測(cè)定分泌到細(xì)胞外的蛋白谈竿。
分泌蛋白：是指在細(xì)胞內(nèi)合成，分泌到細(xì)胞外起作用的蛋白質(zhì)摸吠，如消化酶空凸、抗體、體液中的部分蛋白成分和部分激素等寸痢。分泌蛋白濃度較低呀洲，故需要更加特異性好、靈敏度高的技術(shù)檢測(cè)其含量啼止。
