蛋白質(zhì)和RNA是具有緊密關(guān)系的生物分子,能夠通過物理相互作用參與完成細(xì)胞的周期并調(diào)控細(xì)胞的生物學(xué)過程雕憔。如果干擾了它們的正常相互作用姿骏,將會導(dǎo)致細(xì)胞功能紊亂,影響植物的生長發(fā)育橘茉。因此工腋,研究RNA與蛋白質(zhì)的相互作用,對于理解細(xì)胞內(nèi)分子調(diào)控機(jī)制和植物的生長發(fā)育機(jī)理具有重要意義畅卓。
以蛋白質(zhì)為中心鑒定與蛋白質(zhì)結(jié)合的RNA擅腰,傳統(tǒng)的方法是使用特異性抗體進(jìn)行免疫共沉淀,鑒定出與蛋白質(zhì)結(jié)合的RNA翁潘,比如RNA immunoprecipitations(RIP)趁冈、Cross-linking and immunoprecipitation(CLIP)。然而拜马,這些傳統(tǒng)技術(shù)的應(yīng)用受到抗體質(zhì)量的限制渗勘,而且很多蛋白無法獲得高質(zhì)量的特異性抗體。如果使用標(biāo)簽抗體就需要對驗材料進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化獲得穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化材料俩莽,并且無法同時對多個RNA結(jié)合蛋白(RNA Binding Protein旺坠,RBP)結(jié)合的RNA進(jìn)行高通量篩選和鑒定,這就限制了RIP和CLIP廣泛的應(yīng)用扮超。
藍(lán)景科信推出一種全新的鑒定與蛋白結(jié)合的RNA技術(shù)平臺:RNA親和純化測序技術(shù)(RNA Affinity Purification Sequencing, RAP-seq)取刃。該技術(shù)是通過體外蛋白表達(dá)技術(shù),表達(dá)出帶有標(biāo)簽的RNA結(jié)合蛋白出刷,然后與RNA在體外進(jìn)行孵育和結(jié)合璧疗,再分離出與目的RBP結(jié)合的RNA,進(jìn)行建庫與高通量測序馁龟,通過生物信息學(xué)分析崩侠,可以鑒定出蛋白質(zhì)結(jié)合的mRNA、lncRNA等與細(xì)胞命運(yùn)緊密相關(guān)的重要RNA坷檩。
RNA親和純化測序(RAP-seq)作為一種新興的技術(shù)却音,不需要針對每個蛋白制備特異性抗體改抡,也無需制備遺傳轉(zhuǎn)化材料,突破了物種的限制僧家,為我們提供了一種有力的手段來探究蛋白與RNA之間的相互作用雀摘,以及這些相互作用如何影響基因的表達(dá)和生物學(xué)功能。高效助力RNA結(jié)合蛋白(RBP)調(diào)控機(jī)制研究八拱。
項目文章(一)
文章標(biāo)題:Populus euphratica?GRP2 interacts with target mRNAs to negatively regulate salt tolerance by interfering with photosynthesis, Na+, and ROS homeostasis
期刊:InternationalJournal of Molecular Sciences
影響因子:4.9
研究使用RNA親和純化測序(RAP-seq)技術(shù)鑒定及揭示了胡楊富含甘氨酸的RNA結(jié)合蛋白PeGRP2與靶向mRNAs相互作用通過影響光合作用、Na+和ROS穩(wěn)態(tài)負(fù)調(diào)控灰楊耐鹽性的機(jī)制涯塔。
項目文章(二)
文章標(biāo)題:Rare variations within the serine/arginine-rich splicing factor?PtoRSZ21?modulate stomatal size to determine drought tolerance in Populus
期刊:New Phytologist
影響因子:8.3
通過RNA親和純化測序(RAP-seq)技術(shù)鑒定了與PtoRSZ21直接相互作用的mRNA分子肌稻,進(jìn)而揭示了這一基因如何通過調(diào)節(jié)氣孔大小來增強(qiáng)楊樹的抗旱能力。研究結(jié)果顯示匕荸,PtoRSZ21調(diào)控了一系列與氣孔發(fā)育相關(guān)的基因爹谭,從而影響了楊樹的水分利用效率和對干旱的耐受度。進(jìn)一步闡明了PtoRSZ21在調(diào)控特定基因的可變剪接過程中的具體機(jī)制榛搔。