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答:免疫共沉淀實驗與親和純化的區(qū)別:
(1)免疫共沉淀以抗體和抗原之間的特異免疫反應為基礎受楼,驗證兩個蛋白質是否在細胞內天然結合垦搬;親和純化不用引入抗體。
(2)免疫共沉淀純化瞬時且較弱相互作用的配體艳汽,親和純化用于純化穩(wěn)定蛋白質復合物的亞基猴贰。
(3)免疫共沉淀實驗強度較低,假陽性率較高河狐;親和純化強度較大米绕,效率很高,而且可以在成分復雜的混合物中提取出目的蛋白馋艺。
(4)免疫共沉淀只能用于驗證栅干,不可以發(fā)現新的相互作用;親和純化可以發(fā)現新的相互作用捐祠。
免疫共沉淀適用于瞬時的碱鳞,較弱的蛋白相互作用,親和純化難以檢測瞬時的蛋白相互作用踱蛀,更適合于穩(wěn)定的蛋白復合物中蛋白的相互作用窿给。免疫共沉淀的原理是形成“目的蛋白-興趣蛋白-興趣蛋白抗體-SPA/Pansobin”的復合物,由于SPA/Pansobin較大率拒,在離心時會沉淀下來崩泡,因此在分離時不需要較大的外力,對相互作用的破壞較小猬膨,因此可以檢測弱的相互作用角撞;親和純化是通過共價鍵將與底物專一性可逆結合的配基偶聯(lián)到基質,配基與混合物中的底物結合后,改變化學條件將其他混合物洗掉靴寂,這一過程中如果配基與底物結合的不牢固磷蜀,就會被同時洗掉,因此只能用于強的相互作用百炬。