????對于測序大家應該都不陌生,我所研究的課題主要是通過二代測序獲得基因組數據進而進行分析族壳。
概述一下
????二代測序技術(next generation sequencing,NGS)糜芳,又稱為高通量測序技術(high-throughput sequencing焚挠,HTS)或深度測序(deep sequencing)闺兢,通過一次對幾十萬到幾百萬條核酸分子進行序列測定卤妒,進而對一個物種的轉錄組和基因組進行細致全貌的分析息尺。
? ? 一般我們對人類基因組的研究策略主要是三個:
????????全基因組重測序(whole genome re-sequencing域庇,WGS)
??????? 全外顯子組重測序(whole exome re-sequencing嵌戈,WES)
??????? 目標區(qū)域測序(target region re-sequencing,TR)
? ? 對于這三個策略如何應用听皿,這完全看課題需要熟呛,沒有人說過這三個策略必須分開進行,實際上目前很多課題組在進行研究的時候尉姨,都會先分析WES和panel的數據庵朝,再考慮進行WGS的測序分析,也有些課題組通過panel篩選病例又厉,再進行WES或WGS的分析九府。以上只是兩個簡單的思路,適用于不同的課題需求覆致。那到底怎么去選取研究策略侄旬,還是根據課題的需求,這充分說明了煌妈,課題設計的重要性勾怒,從我踩過的坑來看,一個好的課題設計声旺,能讓你后續(xù)的分析少碰很多壁笔链,而且我覺得課題是循序漸進的,具體怎么去做要根據預實驗好好的驗證腮猖。
? ? 而我的課題就是屬于沒有被好好設計的那種鉴扫,那么我的研究對象主要是(全是)WGS的數據了,既然這已經改變不了了澈缺,那就好好分析坪创,以找出差異基因炕婶,爭取早日脫離苦海。
? ? 那么之后我要分析的內容其實是以WGS的數據為對象莱预,當然柠掂,這并沒有太大影響,因為很多分析是大同小異的依沮。
????這里貼一張某測序公司培訓時給的WGS數據分析流程涯贞,我的樣本測序就是交給這家公司來完成的,這張照片比較早危喉,大概是2018年四月時候的培訓宋渔,不知道這家公司現在還是不是這么分析的,但這并不重要辜限,目前大體的分析流程大同小異皇拣,一般發(fā)表的文章也會提供分析方法,也是值得大家借鑒的薄嫡。
? ? 而我后面的分析方法和流程與這里也是有差別的氧急,但我為什么沒有貼我自己的流程圖呢,主要是因為我的流程細節(jié)部分還在不斷的修改過程中毫深,我后面的文章會按照我的流程進行一步步的介紹态蒂,也會拋出我遇到的問題,希望能得到大家的指點费什,大家共同交流,批評指正J炙亍Tе贰!